【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种植物组培方法，具体涉及一种，属生物
。
技术介绍
随着生物技术和分子生物学的快速发展，烟草转基因的研究越来越深入和完善。目前，转基因烟草的研究提高了烟草抵抗病害、虫害、逆境、除草剂、重金属污染的能力，在提高烟草品质和安全上也发挥了重要作用。由于烟草易于进行组织培养、容易得到再生转化烟株，作为模式植物，烟草在生物功能基因组研究中，占有举足轻重的地位。植物组织、细胞或原生质体经遗传转化后需进行筛选，将转化子和非转化子区分开来，并将非转化子淘汰。目前对烟草转化子的筛选主要采用抗生素筛选法。即在目的基因旁边融合一个编码转化或分解某种抗生素酶的报告基因。这种报告基因表达的产物(Enzyme)可使被转化的细胞或植株能抵抗某一特定的抗生素.而非转化细胞团不具有抗性基因而在筛选培养基中死亡。在烟草遗传转化过程中，大量的工作都集中在培养基的配制和接种上，尤其是培养基的配制。在常规的农杆菌介导烟草转基因过程中，需要添加一些能抑制农杆菌生长的抗生素，这些抗生素不耐高温高压，只能通过过滤灭菌后才能加入培养基中。常规情况下是，培养容器和培养基经过高温高压灭菌后，冷却到40°C -50°C，再加入经过滤灭菌后的抗生素，然后分装到培养容器中，冷却凝固后备用。以上工作程序繁锁、工作量大。如果能找到一种无需高温高压、又能抑制农杆菌生长、同时还不影响烟草正常生长的培养基，就可以解决以上问题。因此，本专利技术将简化烟草由农杆菌介导后的筛选培养环节，人工操作的效率将大幅度提高，从而大幅度降低人工成本。不仅如此，由于培养基自身具有杀菌、抗菌或抑菌作用，后期的组...
【技术保护点】
一种烟草遗传转化后的抑菌培养方法，包括抑菌剂的配制、培养容器消毒、农杆菌转化、培养基配制、共培养、筛选培养、生根培养、抗性苗检测，其特征在于：(1)抑菌剂的配制：称2.4g的富马酸二甲酯用20ml无水乙醇溶解后，加20％的次氯酸钠溶液100ml，加20g山梨酸钾，再加2g乳酸链球菌素，用蒸馏水定容到200ml；(2)培养容器消毒：将培养瓶及瓶盖在抑菌剂与水的体积比为1‰～2‰的水溶液中浸泡不少于10h，保存备用；(3)农杆菌转化：选择携带hyg基因的植物表达载体，导入根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)菌株EHA105中，制成转化菌液，用转化菌液侵染烟草叶片；(4)培养基配制：共培养培养基为MS+0.5mg/L BA+100μmol/L乙酰丁香酮+0.4～0.5ml/L抑菌剂+20.0g/L蔗糖+3.5g/L琼脂粉，pH5.8；筛选培养基为MS+0.1～0.5mg/L6‑BA+30mg/L潮霉素+0.4～0.5ml/L抑菌剂+300mg/L Timentin+30.0g/L蔗糖+3.5g/L琼脂粉，pH5.8；生根培养基为1/2MS+0.4～0.5ml/L抑...
【技术特征摘要】
1.一种烟草遗传转化后的抑菌培养方法，包括抑菌剂的配制、培养容器消毒、农杆菌转化、培养基配制、共培养、筛选培养、生根培养、抗性苗检测，其特征在于: (1)抑菌剂的配制:称2.4g的富马酸二甲酯用20ml无水乙醇溶解后，加20%的次氯酸钠溶液100ml，加20g山梨酸钾，再加2g乳酸链球菌素，用蒸馏水定容到200ml ； (2)培养容器消毒:将培养瓶及瓶盖在抑菌剂与水的体积比为1%。~2%。的水溶液中浸泡不少于10h，保存备用； (3)农杆菌转化:选择携带hyg基因的植物表达载体,导入根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)菌株EHA105中，制成转化菌液，用转化菌液侵染烟草叶片； (4)培养基配制:共培养培养基为MS+0.5mg/L ΒΑ+100 μ mol/L乙酰丁香酮+0.4~ 0.5ml/L抑菌剂+20.0g/L蔗糖+3.5g/L琼脂粉，pH5.8 ;筛选培养基为MS+0.1~0.5mg/L6-BA+30mg/L 潮霉素 +0.4 ~0.5ml/L 抑菌剂 +300mg/L Timentin+30.0g/L 蔗糖 +3.5g/L琼脂粉，pH5.8 ;生根培养基为 1/2MS+0.4 ~0.5ml/L 抑菌剂 +300mg/L Timentin+30g/L 蔗糖+3.5g/L琼脂粉，ρΗ5.8 ;所述MS培养基为1962年，Murashige和Skoog公开的MS培养基；所述6-ΒΑ，指6-苄氨基嘌吟；配制培养基时，先不加抑菌剂，按各培养基配方配齐其他原料后，定容、加热至琼脂粉完全溶解，等温度降到40~50°C时，再按各培养基配方添加抑菌剂，用lmol/L的NaO...
【专利技术属性】
技术研发人员：许莉萍，林庆良，高世武，陈晓英，
申请(专利权)人：福建农林大学，
类型：发明
国别省市：福建;35
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