【技术实现步骤摘要】
—种从肝素制品中提取基因组DNA的方法
本专利技术涉及一种从肝素制品中提取基因组DNA的方法，属于核酸纯化领域。
技术介绍
肝素是由猪、牛或羊的肠粘膜等组织中提取的黏多糖硫酸酯类物质，被世界公认为“生物黄金”，是很多重大疾病及手术治疗的重要临床用药，并在科研中用途广泛。目前年市场额近100亿美元，全球60%以上的肝素钠原料由中国提供。上世纪90年代以来，受疯牛病、口蹄疫等严重威胁人类健康的传染病影响，牛羊源的肝素制品在生产及使用上被严格控制，各制剂厂均要求药用肝素钠必须单一来源于猪小肠粘膜，一般要求牛羊等基因比例不得超过0.1%。2011年美国食品药品监督管理局(FDA)对肝素钠粗品检测的指导意见为能够对肝素钠物种来源进行定量测定，并具有足够准确性和特异性。目前，动物源性成分的检测方法有物理、化学、免疫学和分子生物学方法(即聚合酶链式反应，PCR法)(以下使用简称PCR)。PCR法通过特异检测肝素制品中残留的基因组脱氧核糖核酸(DNA)(以下简称DNA)，可以快速灵敏的对肝素的物种来源进行鉴定。但由于肝素对PCR反应具有较强的抑制作用，若要使得这一便捷的测定方法得到广泛推广使用，需要在从肝素制品中提取残留的基因组DNA时有效清除肝素的残留对PCR的影响。现有的清除肝素的主要方法一般是使用肝素酶消化处理样本，但该过程处理时间较长，一般为18小时左右，且由于肝素 酶价格昂贵，也在一定程度上限制了 PCR测定法的使用。
技术实现思路
本专利技术的目的是提出一种从肝素制品中提取基因组DNA的方法，采用一种特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的裂解体系，以快速...
【技术保护点】
一种从肝素制品中提取基因组DNA的方法，其特征在于该方法包括以下各步骤：（1）称取20毫克肝素钠样品置于1.5毫升离心管中，加入400微升裂解液，振荡混匀后放入65℃水浴锅中保持20分钟，每隔5分钟振荡一次，以使样品充分溶解，溶解后得到的混合液呈透明状；注意裂解液中含有不溶性树脂，使用前应充分振荡混悬。（2）将上述混合液置于离心机中进行离心分离，离心分离的转速为12000转/分钟，离心分离时间为5分钟；（3）取出步骤（2）中离心分离得到的上清液转入硅膜吸附柱中，将硅膜吸附柱放入1.5毫升离心管中，将离心管置于离心机中，在12000转/分钟的转速下离心分离30秒，弃去离心分离的废液；（4）向步骤（3）的硅膜吸附柱中加入400微升第一漂洗液，放入80℃水浴中，保持10分钟，然后在12000转/分钟的转速下离心分离30秒，弃去离心分离的废液；（5）向步骤（4）的硅膜吸附柱中加入400微升第二漂洗液，在12000转/分钟的转速下离心分离30秒，弃去离心分离废液；（6）向步骤（5）的硅膜吸附柱中加入500微升第三漂洗液，在12000转/分钟的转速下离心分离30秒，弃去离心分离废液；（7）重复步骤...
【技术特征摘要】
1.一种从肝素制品中提取基因组DNA的方法，其特征在于该方法包括以下各步骤: (1)称取20毫克肝素钠样品置于1.5毫升离心管中，加入400微升裂解液，振荡混匀后放入65°C水浴锅中保持20分钟，每隔5分钟振荡一次，以使样品充分溶解，溶解后得到的混合液呈透明状；注意裂解液中含有不溶性树脂，使用前应充分振荡混悬。 (2)将上述混合液置于离心机中进行离心分离，离心分离的转速为12000转/分钟，离心分尚时间为5分钟； (3)取出步骤(2)中离心分离得到的上清液转入硅膜吸附柱中，将硅膜吸附柱放入1.5毫升离心管中，将离心管置于离心机中，在12000转/分钟的转速下离心分离30秒，弃去离心分离的废液； (4)向步骤(3)的硅膜吸附柱中加入400微升第一漂洗液，放入80°C水浴中，保持10分钟，然后在12000转/分钟的转速下离心分离30秒，弃去离心分离的废液； (5)向步骤(4)的硅膜吸附柱中加入400微升第二漂洗液，在12000转/分钟的转速下离心分离30秒，弃去离心分离废液； (6)向步骤(5)的硅膜吸附柱中加入500微升第三漂洗液，在12000转/分钟的转速下离心分离30秒，弃去离 心分离废液； (7)重复步骤...
【专利技术属性】
技术研发人员：吕书锋，俞萍，李晓晨，孙克非，
申请(专利权)人：天根生化科技北京有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11
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