酶法降解浒苔多糖的方法技术

本发明专利技术公开了一种酶法降解浒苔多糖的方法：将浒苔粗多糖或浒苔多糖配置成浓度为1～20mg/mL的多糖溶液；然后以糖化酶作为水解酶，于pH为3.5～5.5、温度为40～60℃反应1～5小时，得首次酶解降解多糖溶液；将首次酶解降解多糖溶液煮沸4～6分钟后，离心以除去糖化酶，得含有首次酶解降解后浒苔多糖的上清液。将上述上清液经透析后冷冻干燥，得粉末状的酶解降解浒苔多糖(分子量范围为7.2～122kDa)。本发明专利技术的方法具有水解效率高，所得多糖体外抗氧化活性好的特点。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了一种：将浒苔粗多糖或浒苔多糖配置成浓度为1～20mg/mL的多糖溶液；然后以糖化酶作为水解酶，于pH为3.5～5.5、温度为40～60℃反应1～5小时，得首次酶解降解多糖溶液；将首次酶解降解多糖溶液煮沸4～6分钟后，离心以除去糖化酶，得含有首次酶解降解后浒苔多糖的上清液。将上述上清液经透析后冷冻干燥，得粉末状的酶解降解浒苔多糖(分子量范围为7.2～122kDa)。本专利技术的方法具有水解效率高，所得多糖体外抗氧化活性好的特点。【专利说明】
本专利技术属于食品生物
，涉及一种。
技术介绍
浒苔是我国东南沿海的一种大型经济性绿藻，资源丰富，本身可以食用，并含有多种活性物质，如浒苔多糖，脂类色素，酚类等。据文献报道，浒苔多糖具有提高哺乳动物免疫力、降血脂、消炎抗菌以及抗氧化等生理功能。因此将浒苔开发成功能食品有很好的前景。浒苔水提多糖主要为水溶性的硫酸多糖，其组成主要是葡萄糖醛酸-木糖-鼠李糖聚合物。浒苔多糖分子量大，如果将其降解成分子量相对较小的产物，则由于游离出更多的活性基团，能会使其生物活性得到提高。据报道，浒苔多糖糖键类型主要是β -1, 4、α -1，2、a -1, 4、α -1, 2，4和β -1, 6，还含有较少量的β -1, 3和α -1, 3糖苷键。酸降解是多糖降解的传统方法，可通过调节酸度、温度和作用时间得到不同降解程度的水解产物。但硫酸多糖在降解过程中其硫酸基易被水解脱落，硫酸基含量的降低会导致多糖的生理活性降低；该方法的降解率为40.05% ;分子量范围一般为5.32~95.6kDa0氧化降解虽可减少多糖在降解过程中的硫酸基脱落，但氧化产物相对较复杂，增加了分离纯化的难度。该方法的降解率为61.32% ;分子量范围一般为2.28~55.9kDa。酶法降解作用条件温和，也可避免硫酸基的脱落，但不易得到水解效率高的酶。但目前对浒苔多糖的酶法降解很少有见报道。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种水解效率高、体外抗氧化活性好的。为了解决上述技术问题，本专利技术提供一种，将浒苔粗多糖或將苔多糖配置成浓度为I~20mg/mL(较佳为4~6mg/mL)的多糖溶液；然后以糖化酶(葡萄糖淀粉酶)作为水解酶，在多糖溶液中加入糖化酶直至糖化酶的终浓度为2~100U/mL(较佳为10~20U/mL);于pH为3.5~5.5、温度为40~60°C反应I~5小时(较佳为于pH为4.5，49°C反应2小时)，得首次酶解降解多糖溶液；将首次酶解降解多糖溶液煮沸4~6分钟后，离心以除去糖化酶，得含有首次酶解降解后浒苔多糖的上清液。备注说明:将浒苔粗多糖或浒苔多糖配置成浓度为I~20mg/mL的多糖溶液，即为:当选用浒苔粗多糖时，浒苔粗多糖的浓度为I~20mg/mL ;当选用浒苔多糖时，浒苔多糖的浓度为I~20mg/mL。离心是指:7000~9000r/s离心4~6min。作为本专利技术的的改进:将含有首次酶解降解后浒苔多糖的上清液用截留分子量为500的透析袋透析，以除去无机盐；得透析液；将透析液冷冻干燥，得粉末状的酶解降解浒苔多糖(分子量较低，分子量范围为7.2~122kDa之间)。备注说明:上述透析时间为20~28小时；冷冻干燥是指在-45~_55°C干燥20~28小时。作为本专利技术的的另一种改进:将含有首次酶解降解后浒苔多糖的上清液进行再次水解，所述再次水解包括如下步骤:在含有首次酶解降解后浒苔多糖的上清液中加入果胶酶，所述果胶酶的用量为浒苔粗多糖或浒苔多糖重量的I~10% (较佳为6~9%) ^pH为3.5~5.5、温度为45~60°C反应I~5小时(较佳为pH为4.5，温度为56°C反应3小时)，得再次酶解降解多糖溶液；将再次酶解降解多糖溶液煮沸4~6分钟后，离心以除去果胶酶，得含有再次酶解降解后浒苔多糖的上清液。备注说明:果胶酶的酶活为30U/mg。离心是指:7000~9000r/s离心4~6min。作为本专利技术的的进一步改进:将含有再次酶解降解后浒苔多糖的上清液用截留分子量为500的透析袋透析，以除去无机盐；得透析液；将透析液冷冻干燥，得粉末状的酶解降解浒苔多糖(分子量较低，分子量范围为7.2~122kDa 之间)。备注说明:上述透析时间为20~28小时；冷冻干燥是指在-45~_55°C干燥20~28小时。在本专利技术中，可用pH3.5~5.5的乙酸-乙酸钠缓冲液进行pH值的调节控制。本专利技术所使用的浒苔粗多糖的纯度(质量含量)为75~80%。在本专利技术中，浒苔粗多糖或浒苔多糖均可通过公知技术获得，例如，浒苔粗多糖也可通过如下方法制备而得:I)、将干燥(含水率≤8.21%，质量％)后的浒苔用捣碎机进行粉碎，过120目筛，得將苔粉末。2)、乙醇除杂:将无水乙醇与浒苔粉末按照20ml/lg的料液比，于90°C水浴条件下搅拌从而除去海藻中的脂溶性成分，所述除杂过程重复2~4次(每次搅拌约30分钟)，过滤，取滤饼。3)、水提浒苔多糖:将步骤2)所得的滤饼按照《浒苔水溶性多糖提取的工艺研究》中的“浒苔水溶性多糖提取工艺”，制备得到浒苔粗多糖水溶液。4)、蛋白的去除:将步骤3)所得的浒苔粗多糖水溶液按照《浒苔多糖脱蛋白方法的研究》中的“浒苔多糖酶法脱蛋白工艺”进行酶法脱蛋白:木瓜蛋白酶的用量为3% (1:￥)，？!1值为6.5，温度50°C，酶解时间为2.5h。再将所得的酶解液利用Sevag法除蛋白多次，离心直至上层几乎无蛋白，减压旋蒸除去氯仿与正丁醇，加入无水乙醇使得其纯度不低于80%，在4°C冰箱醇沉12h后，再离心，沉淀用无水乙醇、乙醚、丙酮的顺序多次洗涤，最后进行冷冻干燥，得浒苔粗多糖。其中，多糖的质量含量为75.45%，即纯度为75.45%。采用本专利技术方法制备而得的酶解降解浒苔多糖粉末，分子量范围为7.2~122kDa之间。采用本专利技术方法制备而得的酶解降解浒苔多糖粉末，测定其抗氧化活性，用高效凝胶渗透层析法测定分子量。本专利技术具有如下技术效果:1.与酸降解等传统方法相比，采用本专利技术的方法降解浒苔多糖作用条件温和，反应时间短。2.得到的降解多糖分子量较低；分子量范围为7.2~122kDa之间。3.与未降解的浒苔多糖相比，具有更好的体外抗氧化活性。【专利附图】【附图说明】下面结合附图对本专利技术的【具体实施方式】作进一步详细说明。图1是由本专利技术实施例1-1得到的酶解浒苔多糖以及未降解多糖的DPPH自由基清除能力的测试结果。图2是由本专利技术实施例1-1得到的酶解浒苔多糖以及未降解多糖的超氧阴离子自由基清除能力的测试结果。图3是由本专利技术实施例1-1得到的酶解浒苔多糖以及未降解多糖的羟基自由基清除能力的测试结果。图4是本专利技术实施例1-1得到的酶解浒苔多糖的高效凝胶渗透色谱图。【具体实施方式】实施例1-1、:取纯度为75.45 %的浒苔粗多糖用pH4.5的乙酸-乙酸钠缓冲液(乙酸和乙酸钠的总浓度为0.lmol/L)溶解成浒苔粗多糖浓度为5mg/mL的粗多糖溶液。先将10 X 104U/mL的糖化酶(葡萄糖淀粉酶)用ρΗ4.5的乙酸-乙酸钠缓冲液(乙酸和乙酸钠的总浓度为0.lmol/L)稀释至100U/mL，得糖化酶酶溶液。取710 μ L糖化酶酶溶液用蒸馏水补足至lmL，得稀释后糖化酶酶本文档来自技高网...

【技术保护点】
酶法降解浒苔多糖的方法，其特征是：将浒苔粗多糖或浒苔多糖配置成浓度为1～20mg/mL的多糖溶液；然后以糖化酶作为水解酶，在多糖溶液中加入糖化酶直至糖化酶的终浓度为2～100U/mL；于pH为3.5～5.5、温度为40～60℃反应1～5小时，得首次酶解降解多糖溶液；将首次酶解降解多糖溶液煮沸4～6分钟后，离心以除去糖化酶，得含有首次酶解降解后浒苔多糖的上清液。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：周涛，许莉莉，
申请(专利权)人：浙江工商大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33