猪丹毒杆菌抗原快速检测试纸条制造技术

本发明专利技术涉及一种猪丹毒杆菌抗原检测试剂显示的器具，特别是涉及一种猪丹毒杆菌抗原快速诊断试纸条，试纸条含有支撑层、反应试剂载体吸附层，支撑层为不吸水薄片条，反应试剂载体吸附层粘贴于支撑层上，从样品测试端依次为纤维层，猪丹毒杆菌抗原金标单抗或多抗纤维层，纤维素膜层，手柄端为吸水材料层；分别用猪丹毒杆菌抗原配对单抗或多抗或单抗溶液在纤维层上印制检测印迹“｜”、“/”或“＼”，分别用羊（兔）抗小鼠或猪IgG的多抗或用SPA溶液在纤维素膜层上印制对照印迹“｜”、“/”或“＼”。该检测试纸条，特异性强，敏感性高，检测结果显示形象、直观、准确，无需仪器设备，无需专业检测人员，费用低，操作简便、快速，可大大降低劳动强度，缩短检测时间，能在饲养场，肉类加工厂，出入境检验检疫局等场所进行现场检测，易于推广应用。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术涉及一种猪丹毒杆菌抗原检测试剂显示的器具，特别是涉及一种猪丹毒杆菌抗原快速诊断试纸条，试纸条含有支撑层、反应试剂载体吸附层，支撑层为不吸水薄片条，反应试剂载体吸附层粘贴于支撑层上，从样品测试端依次为纤维层，猪丹毒杆菌抗原金标单抗或多抗纤维层，纤维素膜层，手柄端为吸水材料层；分别用猪丹毒杆菌抗原配对单抗或多抗或单抗溶液在纤维层上印制检测印迹“｜”、“/”或“＼”，分别用羊（兔）抗小鼠或猪IgG的多抗或用SPA溶液在纤维素膜层上印制对照印迹“｜”、“/”或“＼”。该检测试纸条，特异性强，敏感性高，检测结果显示形象、直观、准确，无需仪器设备，无需专业检测人员，费用低，操作简便、快速，可大大降低劳动强度，缩短检测时间，能在饲养场，肉类加工厂，出入境检验检疫局等场所进行现场检测，易于推广应用。【专利说明】猪丹毒杆菌抗原快速检测试纸条一、
本专利技术是一种涉及猪丹毒杆菌抗原的检测试剂显示器具，特别是涉及一种可检测猪丹毒杆菌抗原的检测试纸条。二、技术背景 猪丹毒是由猪丹毒杆菌引起猪的一种急性、热性传染病。不同年龄的猪均可感染，但主要侵害3~12月龄的架子猪，哺乳仔猪和产子母猪很少发生。人感染发病时称为类丹毒。本病虽然一年四季均可发生，但在北方地区以夏季炎热、多雨季节流行最盛，而在南方地区则在冬春季节流行。常为散发性或地方流行传染，有时爆发流行。主要由污染的饲料、土壤经消化道感染，创伤皮肤也可感染。该病流行于世界各地，对养猪业危害很大。病猪、带菌猪、及带菌禽类是该病的主要传染源，潜伏期:4~5天，其发病特征为急性病例呈败血型，开始发病时1~2头猪无任何症状突然死亡，随后出现较多的发病或死亡病猪，体温升高42°C以上。食欲废绝，行走摇摆，呼吸困难，粘膜发绀，发病几天后，胸、腹、四肢内侧及耳部皮肤出现大小不等的红斑，指压退色，病末期心脏衰弱、体温下降、虚脱死亡。剖检皮肤充血呈弥漫性红色。脾脏充血、肿大、柔软，呈暗红褐色。肾脏黄褐色或暗红色，充血肿大。肝淤血、棕红色。胃粘膜、十二指肠、空肠粘膜肿胀，大肠无明显变化。亚急性病例，在皮肤上发生大小不等、形状不一的紫红色疹块，俗称打火印。剖检病死猪除有特征性的皮肤疹块外，其脾、肾也表现败血型变化。慢性大多由急性、亚急性转变而来，主要表现关节炎和心内膜炎，剖检关节肿大、关节腔内淡黄色液体增多，关节囊增厚，关节变形。心内膜炎型常见于二尖瓣形成颗粒状增生物，外观似菜花样病变。常用检测方法如下。(1)显微镜检查:将病料最好是肝、肾涂片(心内膜疣状赘生物可表面触片)，自然干燥，用甲醇固定2~5分后，用美蓝或复红也可用姬姆萨氏或瑞特氏染色法及革兰氏染色法染色后镜检。本菌在镜下呈瘦长、正直或稍弯曲、纤细的杆菌。并呈散在、单个、成对或小堆状或簇集于白细胞中。从心内膜赘生物制成的涂片，常可见有弯曲、长短不等、丝状菌体，并呈乱发状。本菌为革兰氏阳性小杆菌；不产生芽胞；无鞭毛，不能运动。(2)细菌培养:①直接分离培养对未被污染的新鲜病料可直接接种于血液琼脂或血清琼脂培养基，置37°C培养24~48小时后，观察结果。在血清琼脂上长出针尖大、透明、灰白色、圆形、微隆起的露珠状小菌落。在血液琼脂培养基上生长的菌落，周围有绿色的狭窄溶血环。如被检材料已经腐败或被污染，可在上述培养基中加入抗生素(100微克/毫升新霉素或400微克/毫升卡那霉素或加入叠氮钠和结晶紫各0.01%)抑制其它革兰氏阴性菌生长。②增菌培养如病料中病原菌少时，应先作增菌培养，即取病料一钼耳，放入普通肉汤或血清肉汤(后者较好)中，培养24小时后观察结果。猪丹毒在肉场中培养24小时后，肉汤呈均匀一致的轻微混浊，管底有少量沉淀，振荡时沉淀物呈小絮片状浮起，无菌膜及附着于管壁的环状物；老龄培养时，多呈絮块或絮条样生长，并常悬浮于试管中央或沉于管底。(3)动物试验:当病料中含菌量极少，或已被污染，作细菌分离诊断有困难时，可接种小动物作为辅助诊断，动物试验也是分离鉴定本菌的一个方面。其方法如下:将病料(疹块部渗出液或血液、脾、肝、肾等)或纯培养物接种于鸽子、小白鼠和豚鼠。先将病料磨碎，用灭菌生理盐水作5?10倍稀释制成悬液。鸽于胸肌接种0.5?I毫升，小白鼠皮下接种0.2毫升，豚鼠皮下或腹腔接种0.5?I毫升。若为肉汤培养物可直接接种。固体培养基上的菌落，需先用灭菌生理盐水洗下，制成菌液再接种。接种后I?4日，鸽子翅、腿麻痹，精神萎顿，头缩羽乱，不吃而死亡。小白鼠出现精神萎顿、背拱、毛乱、闭眼、不吃，3?7天死亡。死亡的鸽子和小白鼠可见脾脏肿大，肺和肝充血，肝有时可见小点坏死。取心血、肾、脾等，涂片镜检或分离培养，均可见有多量猪丹毒杆菌。豚鼠对猪丹毒杆菌有很强的抵抗力，接种后常不表现任何症状，仍健康存活。(4)聚合酶链式反应(PCR)技术:PCR技术具有高灵敏度、高特异性等优点，PCR方法已被广泛运用于猪丹毒杆菌的鉴定和流行病学调查。此外，还建立了检测猪丹毒杆菌的ELISA方法。上述检测方法需要专业人员在实验室操作，操作繁琐，检测费时费力；而且需要昂贵的仪器设备，如PCR仪、酶标仪等，对非专业人员而言，上述检测方法很难完成。虽然上述方法特异敏感，但无法实现现场快速检测或诊断。本专利技术，研究一种简便快速、实时在线检测试纸，对控制和消灭此疾病意义重大。三、
技术实现思路
本专利技术的目的是为了克服现有技术中检测猪病病原存在的缺点，提供一种特异、敏感、简便快速的猪丹毒杆菌检测方法，研制出检测猪丹毒杆菌抗原的检测试纸条。本专利技术的技术方案是:提供一种猪丹毒杆菌抗原的检测试纸条，该试纸条含有支撑层和吸附层，支撑层为不吸水的薄片层，吸附层附着在支撑层上，吸附层从测试端依次为样品吸附纤维层、金标抗体纤维层、纤维素膜层和手柄端的吸水材料层，在纤维素膜层上设有检测印迹和对照印迹；金标抗体纤维层吸附有纳米级金颗粒标记的抗猪丹毒杆菌抗原的单克隆抗体，检测印迹用抗猪丹毒杆菌抗原的配对单抗印制，对照印迹用羊或兔抗小鼠IgG的多克隆抗体；或金标抗体纤维层吸附有纳米级金颗粒标记的抗猪丹毒杆菌抗原的多克隆抗体，检测印迹用抗猪丹毒杆菌抗原的单抗制备，对照印迹用金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)或抗猪IgG多抗制备。检测印迹用抗猪丹毒杆菌抗原的配对单抗制备即用猪丹毒杆菌抗原的配对单抗溶液制备；检测印迹用抗猪丹毒杆菌抗原的多克隆抗体制备即为用猪丹毒杆菌抗原的多克隆抗体制备。支撑层用不吸水的硬质塑胶片条或硬纸条制成；测试端样品吸附纤维层用玻璃棉制成；金标抗体纤维层用玻璃棉和金标抗体制成，金标抗体可以是单抗或多克隆抗体。纤维素膜层用硝酸纤维素膜、或纯纤维素膜、或羧化纤维素膜、或聚偏二氟乙烯PVDF纤维素膜制成。吸水材料层用吸水纸制成。检测印迹和对照印迹为直线式、或斜线式，纤维素膜层上含有一条检测印迹和一条对照印迹，检测印迹和对照印迹的排列形式为“ I I ”、“/ /”、“\\”中的任一种。试纸条吸附层上面含有一层保护层，保护层附着在吸附层上，在测试端样品吸附纤维层、金标抗体纤维层及吸水材料层上覆盖有保护膜，在测试端样品吸附纤维层与金标抗体纤维层交界处对应的保护膜上印制有样品标记线，该标记线偏向测试端样品吸附纤维层一侧处约0.5cm处。根据需要，选择上述金标本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测猪丹毒杆菌抗原的检测试纸条，该试纸条含有支撑层和吸附层，支撑层为不吸水的薄片层，吸附层附着在支撑层上，吸附层从测试端依次为样品纤维层、金标抗体纤维层、纤维素膜层和手柄端的吸水材料层，在纤维素膜层上制备有检测印迹和对照印迹，其特征是金标抗体纤维层吸附有纳米级金颗粒标记的抗猪丹毒杆菌抗原的单克隆抗体，检测印迹用抗猪丹毒杆菌抗原的配对单抗或多克隆抗体印制，对照印迹用羊或兔抗小鼠IgG的多克隆抗体或金黄色葡萄球菌A蛋白（SPA）印制。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张改平，李学伍，邢广旭，邓瑞广，赵东，杨继飞，柴书军，王方雨，
申请(专利权)人：河南省农业科学院，
类型：发明
国别省市：河南;41