一种出血性大肠杆菌O157:H7酶联免疫检测试剂盒制造技术

本实用新型专利技术涉及一种出血性大肠杆菌O157:H7酶联免疫检测试剂盒，它包括盒体，所述盒体内设有自封袋和衬垫，所述自封袋内设有包被了抗出血性大肠杆菌O157:H7单克隆抗体的酶标反应板，所述衬垫上设有数个容器孔，所述容器孔内分别设有阳性对照溶液、阴性对照溶液、10×浓缩洗涤液、显色液、终止液、酶标抗体溶液和酶标抗体稀释液，所述酶标抗体为辣根过氧化物酶标记的抗出血性大肠杆菌O157:H7的单克隆抗体。本实用新型专利技术的试剂盒可特异、高效地检测出血性大肠杆菌O157:H7。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本技术涉及一种出血性大肠杆菌O157:H7酶联免疫检测试剂盒，它包括盒体，所述盒体内设有自封袋和衬垫，所述自封袋内设有包被了抗出血性大肠杆菌O157:H7单克隆抗体的酶标反应板，所述衬垫上设有数个容器孔，所述容器孔内分别设有阳性对照溶液、阴性对照溶液、10×浓缩洗涤液、显色液、终止液、酶标抗体溶液和酶标抗体稀释液，所述酶标抗体为辣根过氧化物酶标记的抗出血性大肠杆菌O157:H7的单克隆抗体。本技术的试剂盒可特异、高效地检测出血性大肠杆菌O157:H7。【专利说明】—种出血性大肠杆菌0157:H7酶联免疫检测试剂盒
本技术属于生物技术和免疫学领域，具体涉及一种检测出血性大肠杆菌0157:H7的酶联免疫试剂盒。
技术介绍
出血性大肠杆菌0157:H7 (Escherichia coli 0157:H7)是肠道大肠杆菌的主要血清型，可通过牛肉及其制品、牛奶及其制品、鸡肉、蔬菜、水果、饮料、水等传播。出血性大肠杆菌0157:H7可引起肠炎，受感染病人的典型临床症状为血便、腹痛、低热或不发热，约有10%的病人可发展成为溶血性尿毒症及血栓性血小板减少性紫癜，并且可对被感染病人的肠道、肝、脾、肾、淋巴、脑、呼吸系统和神经系统造成损伤。老人和儿童为高危人群，易发生溶血性尿毒症，死亡率高达30%以上。世界卫生组织已经将出血性大肠杆菌0157:H7肠炎列为新发传染病。出血性大肠杆菌0157:H7感染已经成为一个世界性的卫生问题。目前出血性大肠杆菌0157:H7的检测主要依赖于国标所规定的生化鉴定，其缺点是操作繁琐、检测周期较长，无法适应大量的样品筛查。分子生物学和免疫学检测是近年来出现的最快速、准确、稳定的快速检测手段，但是检测产品全部依赖进口，我国目前尚无拥有完全自主知识产权，且可运用于检测实践的快速检测产品，该专利以出血性大肠杆菌0157:H7为检测靶标，所要求保护的技术涉及出血性大肠杆菌0157:H7快速检测产品。
技术实现思路
本技术的目的是提供一种检测出血性大肠杆菌0157:H7的检测试剂盒。具体而言，本技术提供了一种出血性大肠杆菌0157:H7酶联免疫检测试剂盒，包括盒体，所述盒体内设有自封袋和衬垫，所述自封袋内设有包被了作为捕捉抗体的抗出血性大肠杆菌0157:H7单克隆抗体的酶标反应板，所述衬垫上设有数个容器孔，所述容器孔内分别设有阳性对照溶液、阴性对照溶液、IOX浓缩洗涤液、显色液、终止液、酶标抗体溶液和酶标抗体稀释液，所述酶标抗体为辣根过氧化物酶标记的作为检测抗体的抗出血性大肠杆菌0157:H7的单克隆抗体。在一优选例中，所述酶标反应板由支撑架和设于支撑架上的可拆卸式微孔条构成，所述微孔条上设有微孔，所述微孔中包被有作为捕捉抗体的抗出血性大肠杆菌0157:H7单克隆抗体。在另一优选例中，所述的作为捕捉抗体的抗出血性大肠杆菌0157:H7单克隆抗体由小鼠杂交瘤细胞系3A8F11B10E7产生，所述作为检测抗体的抗出血性大肠杆菌0157:H7的单克隆抗体由小鼠杂交瘤细胞系GS2-D3产生。此外，在本技术的试剂盒中还可包含使用说明书，用于说明其中装载的试剂的使用方法。本技术的酶联免疫试剂盒的检测原理及有益效果如下:本技术的试剂盒采用的是双抗体夹心酶联免疫法。当在酶标反应板微孔条上预包被抗出血性大肠杆菌0157:H7单克隆抗体(捕捉抗体)时,加入样品溶液或标准品后，再加入辣根过氧化物酶标记的抗出血性大肠杆菌0157:H7单克隆抗体(检测抗体)，样品或标准品中存在的出血性大肠杆菌0157:H7与酶标反应板上包被的抗出血性大肠杆菌0157:H7单克隆抗体相结合，加入检测抗体后，会形成“抗体一抗原一酶标抗体”复合物，经过TMB(四甲基联苯胺)显色后会形成黄色物质，从而判断样品中出血性大肠杆菌0157: H7的存在与否以及存在的量。用酶标仪于450nm下测定吸光度值。阴性对照≤0.1、阳性对照≤0.3，实验结果有效，否则结果判定为无效；检测孔OD值> 0.2时，判定为阳性；检测孔OD值介于0.1-0.2之间时，判定为弱阳性；检测孔OD值< 0.1判定为阴性。试验表明，本技术的出血性大肠杆菌0157:H7酶联免疫试剂盒，有较高的灵敏度和准确度。板间误差小于10%，板内CV小于3%。与单增李斯特、猪霍乱沙门、鼠伤寒沙门、肠炎沙门、福氏志贺、宋内氏志贺、鲍氏志贺、副溶血弧菌、阪崎肠杆菌、阪崎肠杆菌、小肠耶尔森氏菌、肺炎链球菌、蜡样芽孢杆菌等均无交叉反应。总之，本技术的试剂盒对样品的前处理要求低，操作简便，检测极限为105cfu/ml，特异性和稳定性好，并与大多数食源性致病菌都没有交叉反应。本技术各个方面的细节将在随后的章节中得以详尽描述。通过下文以及权利要求的描述，本技术的特点、目的和优势将更为明显。【专利附图】【附图说明】图1是本技术的检测试剂盒的结构示意图； 图2是本技术的检测试剂盒的酶标反应板的示意图。附图标记释义:1.盒体；2.衬垫；3.容器孔；4.微孔板；5.支撑架；6.微孔条；7.微孔。【具体实施方式】下面结合具体实施例，进一步阐述本技术。应理解，这些实施例仅用于说明本技术而不用于限制本技术的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如Sambrook等人,分子克隆:实验室指南(New York:Cold Spring HarborLaboratory Press, 1989)中所述的条件,或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本技术中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。实施例1.本技术的检测试剂盒的组成、制备及其应用 一、酶联免疫试剂盒由下述物质组成(如图1、图2 ):(I)预包被抗体的酶标反应板(4):酶标反应板由支撑架(5)和设置在支撑架上的可拆卸式微孔条(6)构成，所述微孔条(6)上设有微孔(7)。用0.02M醋酸缓冲液(pH2.0)溶液稀释、抗出血性大肠杆菌0157:H7单克隆抗体3A8F11B10E7包被96孔酶标反应板(4)上的微孔(7)，每孔100μΙ。4°C孵育过夜，按照常规ELISA方法封闭洗涤。酶标反应板装于铝箔自封袋内。(2 )出血性大肠杆菌0157: H7阳性对照标准品(灭活的出血性大肠杆菌0157: H7菌液)一管和阴性对照标准品(灭菌的改良E.C新生霉素增菌肉汤)一管。(3)辣根过氧化物酶标记的抗出血性大肠杆菌0157:H7的单克隆抗体GS2-D3溶液一管。(4)酶标抗体稀释液一管:0.0lM PBS，ρΗ7.6。(5)10Χ浓缩洗涤液一管:含有0.5%吐温-20和0.2%叠氮钠的0.1M磷酸盐缓冲液，ΡΗ7.4，使用时将浓缩洗液10倍稀释即可。(6 )显色液A液一管，显色液B液一管。使用前将A液与B液等体积混合。(7)终止液一管:2Μ硫酸溶液。(8 )设有数个容器孔(3 )的衬垫(2 )。二、酶联免疫试剂盒中各组分的制备(一)将出血性大肠杆菌单克隆抗体3A8F11B10E7作本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种出血性大肠杆菌O157:H7酶联免疫检测试剂盒，包括盒体，其特征在于，所述盒体内设有自封袋和衬垫，所述自封袋内设有包被了作为捕捉抗体的抗出血性大肠杆菌O157:H7单克隆抗体的酶标反应板，所述衬垫上设有数个容器孔，所述容器孔内分别设有阳性对照溶液、阴性对照溶液、10×浓缩洗涤液、显色液、终止液、酶标抗体溶液和酶标抗体稀释液，所述酶标抗体为辣根过氧化物酶标记的作为检测抗体的抗出血性大肠杆菌O157:H7的单克隆抗体。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘箐，郭慧琴，邱实，
申请(专利权)人：上海理工大学，
类型：新型
国别省市：上海;31