本发明专利技术公开了“一种芋头地方品种快速提纯复壮的方法”，属于生物技术领域。在芋头收获季节按单株取茎尖作为外植体，诱导形成组培苗。对组培苗进行病毒鉴定，将无毒组培苗进行2代扩繁形成脱毒组培苗株系。将完成生根的脱毒组培苗按株系移栽到网室基质苗床上生长，收获核心种芋。对脱毒组培苗株系进行考种鉴定，保留具有品种典型特性脱毒组培苗株系，并将此脱毒组培苗株系的种芋混合，即形成较大规模的提纯复壮品系。再经后续扩繁体系繁殖后，则可将脱毒种芋用于生产。本发明专利技术利用组织培养技术快速扩繁、脱毒和室内环境可控的特点，将原来需要三年才能完成的靖江香沙芋地方品种的提纯复壮及脱毒核心种芋生产工作，缩短为一年完成。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了“”，属于生物
。在芋头收获季节按单株取茎尖作为外植体，诱导形成组培苗。对组培苗进行病毒鉴定，将无毒组培苗进行2代扩繁形成脱毒组培苗株系。将完成生根的脱毒组培苗按株系移栽到网室基质苗床上生长，收获核心种芋。对脱毒组培苗株系进行考种鉴定，保留具有品种典型特性脱毒组培苗株系，并将此脱毒组培苗株系的种芋混合，即形成较大规模的提纯复壮品系。再经后续扩繁体系繁殖后，则可将脱毒种芋用于生产。本专利技术利用组织培养技术快速扩繁、脱毒和室内环境可控的特点，将原来需要三年才能完成的靖江香沙芋地方品种的提纯复壮及脱毒核心种芋生产工作，缩短为一年完成。【专利说明】
本专利技术“”，是由芋头茎尖离体条件下组织培养获得试管苗，属于生物
。
技术介绍
江苏省拥有较多地方特色芋头品种，具有较好的营养保健品质，并含有多种维生素，既可以当粮食，又可做蔬菜，是老幼皆宜的滋补品，加工前景广阔，闻名并畅销国内外市场。一直以来，我国芋头种植是以农民自发零星种植为主，所用芋种以农民自留种为主。很多农户用种混乱，生产受病毒病危害。长期种植后许多芋头地方特色品种发生混杂退化和严重病毒感染，外观品质和丰产性能均显著降低。因此，对我国优质地方特色芋头品种的提纯复壮是各地区芋头生产 的一项重要任务。而传统的品种提纯复壮方法需要3-4年时间，耗时较长。利用组织培养技术，将秋季收获的种芋，冬季在组培室诱导形成组培苗并扩繁就可形成组培苗株系，第二年春季移入苗床生长，到秋季就可获得提纯复壮株系，大大缩短了时间。本专利技术充分利用组织培养技术快速扩繁、脱毒和室内环境可控的特点，加快了芋头地方品种提纯复壮进程，保持了品种的优良特性，有效地保护了具有地方特色的种质资源。此方法同样适用于采用无性繁殖、繁殖系数低、带病毒的植物品种。
技术实现思路
技术问题 本专利技术的目的是找到既能加快芋头地方品种提纯复壮进程，又能保持该品种稳定性的方法，此方法具有提纯速度快、提纯了的品种产量高，品质优，不带病毒等优点，可以弥补传统提纯复壮方法耗时长的缺点，从而为芋头地方品种提纯复壮提供一种新的方法。技术方案 一种芋头地方品种提纯复壮的方法，包括以下步骤: (1)芋头地方品种组培株行形成:选取保存完好，无腐烂斑点的种芋，经催芽处理后，剥取茎尖、接种，灭菌后的种芋萌发茎尖接种在添加浓度0.5mg/L TDZ的基本培养基中培养；I个月后更换成添加浓度1.0mg/L TDZ的基本培养基中培养，诱导形成组培苗，每个种芋所获得的组培苗形成芋头地方品种株行； (2)病毒鉴定:对每株组培苗单株分别进行病毒鉴定，淘汰带病毒植株； (3)株系形成:不带病毒单株每2个月更换一次培养基，扩繁培养2代，转入生根培养基上进行培养，生根培养基成分为1/2MS+琼脂7g/L+蔗糖30g/L+活性炭0.2g/L +6-BA0.lmg/L+NAA 0.5mg/L ;培养30d形成完整的组培苗； 以上基本培养基为MS中添加琼脂7g/L和蔗糖30g/L，MS为M0222.0050培养基，高压灭菌前用浓度0.lmol/L的氢氧化钠溶液调整培养基pH值至5.8，保持121°C灭菌20min，培养室温度为25±2°C，光照强度1200-15001x，每天光照12h/d ；(4)株系种芋获得:将脱毒组培苗株系移栽于网室的基质苗床上，行距45cm，株距40cm，获得脱毒组培苗株系核心种芋； (5)株系种芋鉴定:对脱毒组培苗株系进行田间考察和考种鉴定，包括叶片和叶柄外观特征以及芋头产品的品质和产量性状，保留具有品种典型特性的脱毒组培苗株系； (6)提纯复壮系获得:将通过品种典型特性和产品的品质和产量性状鉴定的脱毒组培苗株系的核心种芋株系混合后，形成芋头地方品种提纯复壮系种芋。所述芋头地方品种为靖江香沙芋。其叶片和叶柄外观特征以及芋头产品的品质和产量性状筛选方法如下: O以植株的叶片和叶柄特征与靖江香沙芋品种典型特性红芽密节，绿柄上部紫色的株系进入产量和品质指标进行筛选； 2)对株系子孙芋平均单产大于1350kg/亩的株系保留进行品质鉴定，其余株系淘汰； 3)品质指标包含口感品质和生理品质指标:口感品质用子芋进行食味品质鉴定，食味指标设: 硬度:硬10分、适中6分、软2分； 糯性:糯8分、适中6分、不糯4分； 沙性:不沙7分、适中10分、沙6分； 粘液:多10分、中8分、少5分； 口感:好10分、中7分、差5分； 香味:浓香味10分、适中味8分、淡味6分、无味2分、异味一 4分； 得分值大于52分的株系保留； 生理指标分别测定淀粉、蛋白质、粗多糖和氨基酸，分别达到25%、2.5%、4.6%和0.2%以上的株系保留。有益效果 本专利技术首次将组织培养技术应用于芋头地方特色品种的提纯复壮，解决具有江苏地方特色的芋头传统提纯复壮方法耗时长的缺点。本专利技术利用芋茎尖离体条件下获得试管苗，有利于实现芋头种苗繁殖工厂化生产。本专利技术具有提纯速度快、提纯了的品种产量高，品质优，不带病毒等优点，一步完成了提纯、脱毒和扩繁较大规模核心种芋。【专利附图】【附图说明】 附图1株行组培苗； 附图2株系组培苗； 附图3核心种芋。【具体实施方式】下面通过基于中国地理标志性农产品靖江香沙芋利用组织培养技术获得提纯复壮系进一步说明本专利技术。I材料与方法 1.1试验材料田间收获的靖江香沙芋农家品种。1.2 方法 1.2.1芋头脱毒组培株系培育 (I)组培苗株行形成:选取保存完好，无腐烂斑点的种芋，经0.2%的1(^1104消毒51^11后整齐地排列在周转箱中，用沙子覆盖到整个芋块的2/3处，放置到光照培养箱中待其萌发。待芽生长到l_3cm时切取茎尖，剥除外层2-3层叶片，流动水冲洗IOmin左右，在超净台上用75%酒精浸泡30s，用84消毒液灭菌10-15min，无菌水漂洗5_7次。灭菌后的茎尖接种在添加浓度0.5mg/L TDZ的基本培养基中培养；I个月后更换成添加浓度1.0mg/L TDZ的基本培养基中培养。(2)病毒鉴定:组培苗长出真叶后，每单株形成的组培苗取0.05g叶片，进行芋花叶病毒检测(芋头花叶病毒试剂盒，南京森贝伽生物科技有限公司)，淘汰病毒检测为阳性的单株。(3)脱毒组培株系形成:不带病毒单株每2个月更换一次培养基，扩繁培养2代，转入生根培养基上进行培养。生根培养基成分为1/2MS+琼脂7g/L+蔗糖30g/L+活性炭0.2g/L +6-BA 0.lmg/L+NAA 0.5mg/L ;培养30d左右即可形成完整的组培苗。基本培养基为MS中添加琼脂7g/L和蔗糖30g/L。MS为M0222.0050培养基(荷兰Duchefa Biochemie公 司)。高压灭菌前用浓度0.lmol/L的氢氧化钠溶液调整培养基pH值至5.8，保持121°C灭菌20min。培养室温度为25±2°C，光照强度1200_15001χ，每天光照12h/d。1.2.2芋头提纯复壮系获得 (1)株系种芋获得:4月底~5月初将脱毒组培苗株系移栽于网室的基质苗床上，11月收获，获得核心种芋。苗床规格:宽1.2m，种3株(行距45cm)，株距40cm，全铺青丰育苗基质(山东省青州青丰育苗基质加工厂出品本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种芋头地方品种快速提纯复壮的方法，包括以下步骤： （1）芋头地方品种组培株行形成：选取保存完好，无腐烂斑点的种芋，经催芽处理后，剥取茎尖、接种，灭菌后的种芋萌发茎尖接种在添加浓度0.5mg/L TDZ的基本培养基中培养；1个月后更换成添加浓度1.0mg/L TDZ的基本培养基中培养，诱导形成组培苗，每个种芋所获得的组培苗形成芋头地方品种株行； （2）病毒鉴定：对每株组培苗单株分别进行病毒鉴定，淘汰带病毒植株； （3）株系形成：不带病毒单株每2个月更换一次培养基，扩繁培养2代，转入生根培养基上进行培养，生根培养基成分为1/2MS+琼脂7g/L+蔗糖30g/L+活性炭0.2g/L +6‑BA 0.1mg/L+NAA 0.5mg/L；培养30d形成完整的组培苗；以上基本培养基为MS中添加琼脂7g/L和蔗糖30g/L，MS为M0222.0050培养基，高压灭菌前用浓度0.1mol/L的氢氧化钠溶液调整培养基pH值至5.8，保持121℃灭菌20min，培养室温度为25±2℃，光照强度1200‑1500lx，每天光照12h/d； （4）株系种芋获得：将脱毒组培苗株系移栽于网室的基质苗床上，行距45cm，株距40cm，获得脱毒组培苗株系核心种芋； （5）株系种芋鉴定：对脱毒组培苗株系进行田间考察和考种鉴定，包括叶片和叶柄外观特征以及芋头产品的品质和产量性状，保留具有品种典型特性的脱毒组培苗株系； （6）提纯复壮系获得：将通过品种典型特性和产品的品质和产量性状鉴定的脱毒组培苗株系的核心种芋株系混合后，形成芋头地方品种提纯复壮系种芋。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：殷剑美，张培通，王立，韩晓勇，郭文琦，李春宏，
申请(专利权)人：江苏省农业科学院，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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