一种鲤钙蛋白酶抑制蛋白基因克隆及其表达量检测的方法技术

本发明专利技术提供了一种鲤钙蛋白酶抑制蛋白基因克隆及其表达量检测的方法。在本发明专利技术中，通过参照已发表的斑马鱼的钙蛋白酶基因mRNA序列进行引物设计，引物CAST1-F、CAST1-R、CAST2-F、CAST2-R、CAST3-F和CAST3-R用于克隆CAST基因部分编码序列，引物CAST3R1、CAST3R2、CAST5R1以及CAST5R2用于克隆CAST基因5’、3’UTR序列，根据所得到的序列确定出鲤CAST基因的完全cDNA序列，并根据所得到的CAST基因cDNA序列设计引物CASTY-F以及CASTY-R检测出鲤各组织中CAST基因表达量。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种鲤钙蛋白酶抑制蛋白基因的克隆方法，其特征在于包括以下步骤：(1)设计多组引物，分别为：CAST1‑F：5’‑TCAACACCTGCATCTTCTGC‑3’；CAST1‑R：5’‑TTGAGCTGGAGACACAAACG‑3’；CAST2‑F：5’‑CGGATACAGAAAGGAAGACCTG‑3’；CAST2‑R：5’‑AGTATGTCCATCGCATCATCTG‑3’；CAST3‑F：5’‑GAACACAGATGATGCGATGG‑3’；CAST3‑R：5’‑TGATCTGGTGGAAGGGAGTC‑3’；CAST3R1：5’‑GTTTGTCCTGCCTCTAAGTCT‑3’；CAST3R2：5’‑TTCAGTCTGCCGTCTCTGGCCCCC‑3’；CAST5R1：5’‑GGTTGTGATGATGGTAAAGTGC‑3’；CAST5R2：5’‑CCTTATCTTTCAGAGGGTCCGT‑3’；所述CAST1‑F、CAST1‑R、CAST2‑F、CAST2‑R、CAST3‑F和CAST3‑R为克隆CAST基因部分编码序列用引物，所述CAST3R1、CAST3R2、CAST5R1以及CAST5R2为克隆CAST基因5’、3’UTR用引物；(2)以目标生物的RNA为模板，在RT‑PCR过程中加入步骤(1)设计的引物进行反转录PCR、电泳，确定CAST基因部分编码序列、CAST基因5’UTR序列以及CAST基因3’UTR序列，并确定目标生物CAST基因完整序列。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陈伟兴，黄金善，管雪婷，苗晓微，
申请(专利权)人：东北农业大学，
类型：发明
国别省市：黑龙江;23