一种新型免疫性肝炎模型的建立方法及应用技术

本发明专利技术涉及乙肝病毒全基因组转染小鼠肝细胞诱发的免疫性肝炎动物模型的制备方法，特别是一种含有肝细胞自身抗原和乙肝病毒抗原的免疫诱导剂及简单的操作程序，产生与人类疾病更具有相似性的免疫性肝炎疾病模型及其在肝炎发病机制研究和抗肝炎药物评价中的应用。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术涉及乙肝病毒全基因组转染小鼠肝细胞诱发的免疫性肝炎动物模型的制备方法，特别是一种含有肝细胞自身抗原和乙肝病毒抗原的免疫诱导剂及简单的操作程序，产生与人类疾病更具有相似性的免疫性肝炎疾病模型及其在肝炎发病机制研究和抗肝炎药物评价中的应用。【专利说明】一种新型免疫性肝炎模型的建立方法及应用
本专利技术涉及一种动物疾病模型的制备方法，特别是一种简单的免疫诱导剂及简单的操作程序，产生与人类疾病更具有相似性的免疫性肝炎疾病模型及其在肝炎发病机制研究和抗肝炎药物评价中的应用。
技术介绍
免疫性肝炎是一组由异常免疫介导的、具有相似临床表现的慢性免疫性肝病，是导致肝功能衰竭和肝硬化的重要病因。近年来，免疫性肝炎检出率逐渐上升，在世界范围内占慢性肝炎的10%~20%。涉及免疫性肝炎的诱因很多，发病机制非常复杂。免疫学细胞障害机制是肝损伤的重要机制之一，“免疫损伤”目前认为是乙肝病毒感染的主要致病机制，即乙肝病毒不直接杀伤肝细胞，感染后肝组织损伤是宿主一系列免疫反应造成的，包括以病毒抗原和肝细胞自身抗原为靶抗原进行免疫攻击造成的损伤。虽然免疫性肝炎的自身抗体已经明确，但其病因和引起肝细胞损伤的机制却仍未完全阐明，主要原因之一是缺乏理想的能够模拟慢性进展性免疫损伤过程的动物模型。而现有的免疫性肝炎动物模型还不能涵盖相应疾病的生理病理特点，仅仅是某些临床症状类似，或者某些病理改变类似，尚无标准的免疫性肝炎动物模型可用。因此，建立与人类疾病在发病机制、病程特点等方面具有相似性的免疫性肝炎模型具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种新型的免疫性肝炎动物模型，该模型适用于常规实验动物，实验周期短，成模率高，简单易行，而且耗费人力财力少，为肝炎发病机制的研究和新型抗肝炎药物的开发提供一种与人类疾病更具相似性的、稳定可靠的疾病模型。为此，本专利技术采取以下技术方案:现有的免疫性肝炎动物模型还不能涵盖相应疾病的生理病理特点，仅仅是某些临床症状类似，或者某些病理改变类似，尚无标准的免疫性肝炎动物模型可用。而用本专利技术采用乙肝病毒全基因组转染小鼠肝细胞诱导建立的免疫性肝炎小鼠模型，由于乙肝病毒转基因小鼠肝细胞既含有肝自身抗原，又含有乙肝病毒抗原，能更好地模拟人类免疫性肝炎尤其是病毒感染诱导的免疫性肝炎。一种用乙肝病毒全基因组转染小鼠肝细胞诱导，无需特殊装置，简单易行，实验周期短的免疫性肝炎动物模型的建立方法。具体制备方法如下:取6周龄的ICR小鼠或C57BL/6小鼠，通过腹腔注射乙肝病毒转基因小鼠肝细胞乳剂，每只0.2毫升，共2-3次，即可诱发产生免疫性肝炎。 本专利技术与现有技术相比具有如下优点:(I)采用乙肝病毒转基因小鼠肝细胞作为免疫诱导剂，由于乙肝病毒转基因小鼠肝细胞既含有肝自身抗原，又含有乙肝病毒抗原，能更好地模拟免疫性肝炎；(2)无需特殊装置，简单易行，实验周期短，成模率高；(3)与人类免疫性肝炎尤其是病毒感染诱导的免疫性肝炎具有良好的相关性；(4)适于肝炎发病机制研究和抗肝炎药物评价。【具体实施方式】实施例1:免疫性肝炎模型的制备及评价I准备以下材料:1.1实验动物:ICR小鼠和C57BL/6小鼠由浙江省实验动物中心提供。1.2乙肝病毒全基因组转染小鼠:上海南方模式动物中心提供。1.3脂多糖:美国SIGMA公司产品。2制备方法按如下步骤:2.1采用灌流的方法分离纯化乙肝病毒全基因组转染小鼠肝细胞。2.2分离的肝细胞用磷酸盐缓冲液悬浮，经超声破碎后，与Freund’ s完全佐剂按I: I比例充分混匀，呈白色乳剂，即免疫诱导剂。2.3清洁级ICR小鼠或C57BL/6小鼠，雌雄各半，常规饲养。2.4取6周龄小鼠，腹腔注射免疫诱导剂I次/周、0.2毫升/只，共2_3次。2.5诱导剂免疫注射2-3次后，即可形成典型的免疫性肝炎模型。3评价方法按如下步骤:3.1建模后检测小鼠血清白蛋白/球蛋白(A/G)、谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)、IgG 和 IgM 水平。3.2建模后采用间接免疫荧光法等检测标志性自身抗体，包括抗可溶性肝抗原/肝胰抗原抗体(SLA/LP)和抗肝肾微粒体I型抗体(LKM-1)、抗肝细胞质I型抗体(LC-1抗体)和抗肝细胞膜特异性脂蛋白抗体(ALSP)水平。3.3实验结束后，处死小鼠，取肝脏组织作病理学检查，观察模型小鼠出现的免疫性肝炎特征性病变一界面性肝炎(位于肝小叶实质区与间质区交界处出现碎屑样坏死伴有炎症细胞浸润)。【权利要求】1.一种新型免疫性肝炎模型的建立方法，包括模型的制作程序及模型评价标准，其特征在于采用一种简单的诱导剂及简单的操作程序，复制出稳定、可靠的免疫性肝炎模型及其在肝炎发病机制研究和抗肝炎药物评价中的应用。2.根据权利要求1所述的新型免疫性肝炎模型的建立方法，其特征在于所述的动物为小鼠，包括ICR小鼠和C57BL/6小鼠。3.根据权利要求1所述的新型免疫性肝炎模型的建立方法，其特征在于所述的免疫诱导剂为乙肝病毒全基因组转染小鼠肝细胞。4.根据权利要求1或2所述的新型免疫性肝炎模型的建立方法，其特征在于所述的免疫诱导途径为腹腔注射。5.根据权利要求1和3所述的新型免疫性肝炎模型的建立方法，其特征在于所述的免疫诱导剂既含有肝细胞自身抗原，又含有乙肝病毒抗原。6.根据权利要求1所述的新型免疫性肝炎模型的建立方法，其特征在于所述的模型评价标准为小鼠转氨酶水平和抗肝细胞自身抗体水平升高，以及肝组织病理学检查出现免疫性损伤变化。7.一种新型免疫性肝炎模型的建立方法如权利要求1所述一种简单的诱导剂及简单的操作程序，复制出稳定可靠的免疫性肝炎模型，其特征在于所述的模型制备方法为每周注射诱导剂I次，每只动物0.2毫升，共注射2-3次。8.根据权利要求1所 述的免疫性肝炎模型的建立在肝炎发病机制研究和抗肝炎药物评价中的应用，其特征在于所述的免疫性肝损伤与人类免疫性肝炎，包括病毒性肝炎引起的肝脏病理改变具有良好的相关性。【文档编号】A01K67/027GK103920165SQ201310014429【公开日】2014年7月16日 申请日期:2013年1月10日 优先权日:2013年1月10日 【专利技术者】伍义行, 沈钰明, 贾袁媛, 张虹莉, 戴灵豪 申请人:中国计量学院本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种新型免疫性肝炎模型的建立方法，包括模型的制作程序及模型评价标准，其特征在于采用一种简单的诱导剂及简单的操作程序，复制出稳定、可靠的免疫性肝炎模型及其在肝炎发病机制研究和抗肝炎药物评价中的应用。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：伍义行，沈钰明，贾袁媛，张虹莉，戴灵豪，
申请(专利权)人：中国计量学院，
类型：发明
国别省市：浙江;33