重组蛋白质、含有该重组蛋白质的医药组成物及该重组蛋白质的制备方法技术

本发明专利技术提供一种含有生物活性胜肽的重组蛋白质、含有该重组蛋白质的医药组成物以及该重组蛋白质的制备方法，其将连续多套的生物活性胜肽置换于一个蛋白质中，再由无毒性安全可食用的酵母菌大量生产富含连续多套生物活性胜肽的高浓度胜肽蛋白。

【技术实现步骤摘要】
重组蛋白质、含有该重组蛋白质的医药组成物及该重组蛋白质的制备方法
本专利技术是与重组蛋白质有关，特别是指一种含有生物活性胜肽的重组蛋白质、含有该重组蛋白质的医药组成物以及该重组蛋白质的制备方法。
技术介绍
胜肽大小是介于胺基酸和蛋白质之间。胺基酸的分子最小，蛋白质最大，两个或以上的胺基酸脱水缩合形成若干个胜肽键从而组成一个胜肽，多个胜肽进行多次脱水缩合就组成一个蛋白质分子。相反的，蛋白质可以被蛋白水解酶水解为蛋白质片段，因此蛋白质也被称为「多胜肽」，胜肽可以小至有纳米般大小，肠胃，血管及肌肤皆极容易吸收。胜肽从功能上可以区分为营养性胜肽以及功能性胜肽，营养性胜肽可提供动物或人体所需胺基酸的来源，功能性胜肽又称做生物活性胜肽，能够在动物或人体内造成特定的生理效果，且应用范围相当广泛。目前生物活性胜肽的生产是利用不同的食用性蛋白，透过蛋白水解酶水解而得，又或是在生产少于5个胺基酸的短链胜肽时，用一个胺基酸黏接另一个胺基酸的方式而成。但是这些方式所生产的生物活性胜肽产量很少，造成产量不足而拉高制备成本的现象。所以当这些生物活性胜肽被制成药品、健康食品或化妆品原料的时候，一般厂商在考虑成本及售价下，所使用的浓度也未达到最佳有效剂量，从而无法显示出这些生物活性胜肽在人体中的功能性，亦无法提供预防或治疗疾病的用。事实上，这些生物活性胜肽在起初筛选功能性时，是最有效的。从实验得知，在动物试验上也一样显示出最完美的功能性来，然而到了口服或应用在人体时，就无法显示出强而有力的功能性出来。究其原因，一方面是制造厂商在产品中所下的胜肽浓度太少所致；另一方面是因口服的胜肽在人体的消化道中已经被破坏殆尽。先前，本专利技术人在中国台湾专利第I315341号「富含降三酸甘油脂的机能性胜肽的蛋白质生成方法」曾发表以淀粉水解酵素(α-amylase)为携带蛋白质，在食用菌中生产，一区插入一套「VVYP」胜肽，六区仅有六套胜肽，携带蛋白质含有胜肽的比例很低，仅有3％，蛋白质回收纯化是用Ni-NTA方法回收，回收过程含有重金属镍，会污染胜肽产物，并且又因为携带蛋白质中所携带的胜肽套数太少，导致产出的胜肽浓度低、生产时间长且仅能小量回收纯化，又有毒性，无法供给人体使用。因此，如何解决胜肽产量太少的问题、提高胜肽的浓度，是目前胜肽产制技术中极重要的课题。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种重组蛋白质、含有该蛋白质的医药组成物及该重组蛋白质的制备方法，以能让生物活性胜肽被巨量表现，以生产富含高浓度、高产量的生物活性胜肽蛋白，同时能有效降低其制备成本。为实现上述目的，本专利技术提供的重组蛋白质，包含有：至少一具有连续多套生物活性胜肽的区段，其中各该生物活性胜肽是选自由GHK、SEQIDNO：2、3、4、5所组成的群组中任一种。所述的重组蛋白质，其中，各该生物活性胜肽之间具有一胃蛋白酶(pepsin)切位。所述的重组蛋白质，其中，各该生物活性胜肽之间具有一胰蛋白酶(trypsin)切位。所述的重组蛋白质，其中，各该生物活性胜肽之间具有一羧肽酶B(carboxypeptidaseB)切位。所述的重组蛋白质，其中，该生物活性胜肽的套数为3～25套。本专利技术提供的医药组成物，包含有如上所述的重组蛋白质。所述的医药组成物，其中，该医药组成物的剂型为选自由乳剂、膏剂、凝胶、涂剂、糊状物、油剂、软化剂、脂肪体剂型、纳米颗粒、化妆水、漱口剂、洗发水、乳液、喷剂、塞剂、胶囊、锭剂、粉末、糖浆、颗粒、溶液、悬浮液、贴片或封闭型敷贴所组成的群组中任一种。本专利技术提供的重组蛋白质的制备方法，包含有下列步骤：(a)提供一蛋白质，该蛋白质具有至少一更改置换区段以及一淀粉吸附区段；(b)将该更改置换区段与一具有连续多套生物活性胜肽的区段置换，其中各该生物活性胜肽系选自由GHK、SEQIDNO：2、3、4、5所组成的群组中任一种；(c)转殖置换后的该蛋白质至一酵母菌表现系统进行发酵；以及(d)以淀粉纯化出该蛋白质。所述的制备方法，其中，该蛋白质为人类酪氨酸羟化酶(humantyrosinehydroxylase)。所述的制备方法，其中，该酵母菌为耶式酵母菌(Yarrowialipolytica)。所述的制备方法，还包含有下列步骤：(e)选定在该多套生物活性胜肽区段大致中间位置的5～7个胺基酸为一重迭区段；(f)替前述5～7个胺基酸设定一不同于其它胺基酸所设定的密码子核酸序列；(g)依此不同于其它胺基酸的密码子核酸序列设计一正向引子与一反向引子，且该正向引子与该反向引子于该重迭区段具有约12～20个互补的核酸碱基；(h)利用聚合酶连锁反应把两段引子个别复制出两段序列；以及(i)用重迭式聚合酶连锁反应技术，将两段序列重迭串联。本专利技术把连续多套生物活性胜肽置换在一个蛋白质中，再由无毒性安全可食用的酵母菌大量生产富含连续多套生物活性胜肽的高浓度胜肽蛋白，除能巨量表现此胜肽蛋白外，并能使生物活性胜肽的两端获得保护，使其可在胃中或小肠中定点切割，完整的生物活性胜肽在十二指肠中或在小肠中被吸收，行使功能性出来。附图说明图1是连续多套胜肽置换设定示意图。图2是帮助睡眠胜肽「YLGYLEQLLR」置换于人体酪氨酸羟化酶中的定序结果。其中黄色表示可更改置换区段，共有5个可更改置换区段，而红色表示原有胺基酸区段，浅蓝色表示结合淀粉的区段。图3是利用中子撞击质谱仪LC-MS-MS确定胜肽胺基酸序列的结果。图4是生物活性胜肽「CDALQEIAR」于胃蛋白酶(pepsin)的切位示意图。图5是生物活性胜肽「VVYP」于胰蛋白酶(trypsin)和羧肽酶B(carboxypeptideB)的切位示意图。图6是生物活性胜肽「YLGYLEQLLR」于胰蛋白酶(trypsin)的切位示意图。图7是用于帮助睡眠的「YLGYLEQLLR」胜肽蛋白与无保护裸露胜肽经唾液、胃液和肠液分解后的SDS-PAGE电泳示意图。第1和第2道是胜肽蛋白，第3和4道是无保护裸露的胜肽。第2和4道是经唾液、胃液和肠液分解。图8是本专利技术的制备方法所生成的生物活性胜肽蛋白给SD大鼠口服的生长曲线示意图。大鼠体重水平以平均值表示，并通过单向方差分析(ANOVA)。使用Dunnett′st-test多重比较方式来评估胜肽蛋白实验组与对照组之间的差异，所有P＞0.05是与对照值的比较结果。具体实施方式本专利技术提供的重组蛋白质，包含有至少一具有连续多套生物活性胜肽的区段，其中各该生物活性胜肽是选自由GHK、SEQIDNO：2、3、4、5所组成的群组中任一种。由此，把多套生物活性胜肽放在一个蛋白质中，以大量生产富含生物活性胜肽的胜肽蛋白，达到高浓度、高产量的生产，同时降低制备成本。于本专利技术的一较佳实施例中，各该生物活性胜肽之间可具有一胃蛋白酶(pepsin)或一胰蛋白酶(trypsin)或一羧肽酶B(carboxypeptidaseB)切位，让生物活性胜肽的两端获得保护，使其可在胃中或小肠中定点切割、释放、被吸收，以行使其功能性出来。本专利技术另提供一种医药组成物，包含有如上所述的重组蛋白质，以此应用于医药领域。于本专利技术的另一较佳实施例中，该医药组成物的剂型可选自由乳剂、膏剂、凝胶、涂剂、糊状物、油剂、软化剂、脂肪体剂型、纳米颗粒、化妆水、漱口剂、洗发水、乳本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种重组蛋白质，包含有：至少一具有连续多套生物活性胜肽的区段，其中各该生物活性胜肽是选自由GHK、SEQ ID NO：2、3、4、5所组成的群组中任一种。

【技术特征摘要】
2012.12.28 TW 10115123.71.一种重组蛋白质，包含有：一如SEQIDNO：1所示的人类酪氨酸羟化酶具有五个连续3～25套生物活性胜肽的区段，各区段的位置为氨基酸21～70、81～130、141～190、201～250以及261～310，其中该各生物活性胜肽是选自由GHK、SEQIDNO：2、3、4所组成的群组中的任一种。2.根据权利要求1所述的重组蛋白质，其中，各该生物活性胜肽之间具有一胃蛋白酶切位。3.根据权利要求1所述的重组蛋白质，其中，各该生物活性胜肽之间具有一胰蛋白酶切位。4.根据权利要求1所述的重组蛋白质，其中，各该生物活性胜肽之间具有一羧肽酶B切位。5.一种医药组成物，包含有如权利要求1所述的重组蛋白质。6.根据权利要求5所述的医药组成物，其中，该医药组成物的剂型为选自由乳剂、膏剂、凝胶、涂剂、糊状物、油剂、软化剂、脂肪体剂型、漱口剂、洗发水、乳液、喷剂、塞剂、胶囊、锭剂、粉末、糖浆、颗粒、溶液、悬浮液、贴片或封闭型敷贴所组成的群组中任一种。7.根据权利要求5所述的医药组成物，其中，该医药组成物的剂型为纳米...

【专利技术属性】
技术研发人员：简宏坚，
申请(专利权)人：简宏坚，
类型：发明
国别省市：中国台湾;71