本发明专利技术公开了一种表达抑制昆虫保幼激素甲基转移酶基因（HaJHAMT基因）的dsRNA的重组杆状病毒及其在制备杀虫剂中的应用。本发明专利技术提供了一种RNA分子，为如下（a）或（b）：（a）序列表的序列7所示的RNA分子；（b）与序列表的序列7反向互补的RNA分子。编码所述RNA分子的DNA分子也属于本发明专利技术的保护范围。含有所述DNA分子的重组载体、重组杆状病毒、表达盒、转基因细胞系或重组菌均属于本发明专利技术的保护范围。本发明专利技术将棉铃虫作为模式昆虫，通过抑制保幼激素甲基转移酶基因在昆虫体内的表达，可以促进杆状病毒对昆虫的杀虫效力，从而达到控制害虫对农作物危害的目的。本发明专利技术对于农业生产具有重大价值。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了一种表达抑制昆虫保幼激素甲基转移酶基因（HaJHAMT基因）的dsRNA的重组杆状病毒及其在制备杀虫剂中的应用。本专利技术提供了一种RNA分子，为如下（a）或（b）：（a）序列表的序列7所示的RNA分子；（b）与序列表的序列7反向互补的RNA分子。编码所述RNA分子的DNA分子也属于本专利技术的保护范围。含有所述DNA分子的重组载体、重组杆状病毒、表达盒、转基因细胞系或重组菌均属于本专利技术的保护范围。本专利技术将棉铃虫作为模式昆虫，通过抑制保幼激素甲基转移酶基因在昆虫体内的表达，可以促进杆状病毒对昆虫的杀虫效力，从而达到控制害虫对农作物危害的目的。本专利技术对于农业生产具有重大价值。【专利说明】表达抑制昆虫保幼激素甲基转移酶基因的dsRNA的重组杆状病毒
本专利技术涉及一种表达抑制昆虫保幼激素甲基转移酶基因的dsRNA的重组杆状病毒及其在制备杀虫剂中的应用。
技术介绍
昆虫的生长发育、蜕皮、变态、滞育、生殖、多型现象等生理过程以及行为反应等都离不开激素的参与。保幼激素(juvenile hormone, JH)是一种低分子量、脂溶性、非蛋白质的萜烯类化合物，已经证明有7种天然JH存在，具体如下:(I) JH0，(2) JHI, (3) JHII, (4)JHIII, (5)4-methyl-JHI, (6)JHII1-bisepoxide, (7)mehtyl famesoate。其中(I)、(2)、、 (5)存在于鳞翅目中，(6)存在于双翅目中，(7)存在于蟑螂中，(4)在所有昆虫中都存在。JH由咽侧体合成和释放，是节肢动物特有的激素，未见于其它动物中。JH的生物合成途径主要是:己酸、丙酸一甲羟戊酸(MVA)—异戊烯基焦磷酸(IPP)—焦磷酸法呢酯一法尼酸(FA) — JH。保幼激素甲基转移酶(JHAMT)的作用为将外源S-腺苷-甲硫氨酸分子中的甲基转移到法尼酸分子形成甲基法尼酯。法呢酸一JH的合成途径，因昆虫种类不同而异。甲基酯化和环氧化是JH合成的特有反应，相应的甲基转移酶(JHAMT)、JH环氧化酶是JH合成的特有反应酶。昆虫激素已成为杀虫剂研究与开发的一个重点领域，其作用机理不同于以往作用于神经系统的传统杀虫剂，毒性低、污染少、对天敌和有益生物影响小，有助于可持续农业的发展、有利于无公害绿色食品生产、有益于人类健康。RNA干扰(RNA interference, RNAi)是一种新发现的基因调控机制,是由与革巴基因序列同源的双链RNA(dsRNA)所诱导的一种特异性基因沉默现象。RNAi在功能基因组学、药物靶位点筛选、细胞信号传导通路分析、疾病治疗等方面都有广泛的应用潜力。杆状病毒(baculovirus)是一类具有囊膜包裹的双链环状DNA病毒,基因组大小为80-180kb。杆状病毒的结构特征为病毒粒子呈杆状，外面包被着一层蛋白质膜，外观有一定规则，称为多角体病毒(NPV)。杆状病毒专一感染节肢动物，其自然宿主主要为鳞翅目、膜翅目和双翅目昆虫，还感染一些甲壳类和螨类。在自然界中，杆状病毒存在出芽病毒粒子(budded virus, BV)和包埋型病毒粒子(occlusion-derived virus, ODV ;又称多角体包涵体，简称PIB或OBs)两种病毒形式。BV是在昆虫细胞之间传播的一种病毒粒子，带有病毒编码的囊膜蛋白，可以与细胞表面的特定受体相结合，在昆虫体内或者细胞系的细胞之间传播。ODV是杆状病毒在环境中的传播形态，包埋于包涵体中。包涵体由多角体蛋白质组成，其外侧为多角体囊膜，在环境中非常稳定，对病毒粒子起到保护作用。未经感染的幼虫吞下含多角体包涵体的食物后，多角体蛋白在昆虫中肠中的酸性PH环境下降解，释放病毒粒子核衣壳，病毒接触并感染昆虫幼虫中肠的表皮细胞组织，制造出芽病毒粒子，芽病毒粒子通过出芽经细胞质膜进入宿主昆虫的血腔中，导致系统感染，在杆状病毒感染后期，病毒粒子被大量多角体蛋白包被，形成多角体包涵体。杆状病毒对宿主昆虫有较高的致病性，对天敌安全，不污染环境，尤其是它能在害虫种群中形成流行病而长期控制虫口并且不产生抗药性，明显优于其它杀虫剂。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种表达抑制昆虫保幼激素甲基转移酶基因(HaJHAMT基因)的dsRNA的重组杆状病毒及其在制备杀虫剂中的应用。本专利技术提供了一种RNA分子，为如下(a)或(b):Ca)序列表的序列7所不的RNA分子(单链RNA分子或双链RNA分子)；(b)与序列表的序列7反向互补的RNA分子(单链RNA分子或双链RNA分子)。编码所述RNA分子的DNA分子也属于本专利技术的保护范围。所述DNA分子为如下I)或2)或3):1)依次由DNA片段1、间隔区和DNA片段II组成的DNA分子；所述DNA片段I如序列表的序列6自5’末端第1-405位核苷酸所示；所述DNA片段II如序列表的序列6自5’末端第630-1034位核苷酸所示；2)序列表的序列6所示的DNA分子；3)序列表的序列2自5’末端第206至610位核苷酸所不的DNA分子。含有所述DNA分子的重组载体、重组杆状病毒、表达盒、转基因细胞系或重组菌均属于本专利技术的保护范围。所述重组载体中，可由opl66启动子(杆状病毒早期启动子)和/或PlO启动子(杆状病毒晚期启动子)启动所述DNA分子的表达。所述opl66启动子具体如序列表的序列5所示。所述PlO启动子具体如序列表的序列8所示。所述重组载体可具有表达盒甲和表达盒乙；所述表达盒甲为用于表达所述DNA分子的表达盒；所述表达盒乙为用于表达杆状病毒多角体蛋白(Ha polh蛋白)的编码基因的表达盒。所述重组载体具体可为将所述opl66启动子、所述DNA分子和所述多角体蛋白的编码基因分别插入表达载体(如载体PFastBac? DUAL)的多克隆位点得到的重组质粒Μ。所述ορ166启动子可插入载体pFastBac? DUAL的NcoI和SmaI酶切位点之间。所述所述DNA分子可插入pFastBac? DUAL的PvuII酶切位点。所述多角体蛋白的编码基因可插入载体pFastBac? DUAL 的 BamHI 和 HindIII 位点之间。所示重组载体具体可为将所述表达盒甲和所述表达盒乙插入Hz8 Z egt Bacmid中的attB位点得到的重组质粒N。 所述重组载体具体可为将所述重组质粒M中Tn7L和Tn7R位点之间包括所述表达盒甲和所述表达盒乙在内的DNA片段插入Hz8 Zl egt Bacmid中的attB位点得到的重组质粒Q。所述Hz8 Zl egt Bacmid为将HaBacHZ8Bacmid中的脱皮甾体尿苷二磷酸葡糖转移酶基因(又称Ecdysteroid UDP-Glucosy I transferase基因，简称egt基因)灭活后得到的重组质粒。所述Hz8 Zl egt Bacmid具体为将序列表的序列9所示的egfp基因取代HaBacHZ8Bacmid中的egt基因的开放阅读框自5’末端116至1470位核苷酸所示的DNA片段得到的重组质粒。所述重组杆状病毒可为出芽病毒粒子的形式或多角体包涵体的形式(多角体包涵体与出芽病毒粒子相比，具有口服感染的能力)。所述重组杆状病毒的出芽病毒粒子具体可本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种RNA分子，为如下（a）或（b）：（a）序列表的序列7所示的RNA分子；（b）与序列表的序列7反向互补的RNA分子。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：朱祯，王晓芳，戴艳，魏晓丽，张磊，
申请(专利权)人：中国科学院遗传与发育生物学研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11
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