一种土壤线虫群落基因组提取方法技术

技术编号:10167598 阅读:177 留言:0更新日期:2014-07-02 10:17
本发明专利技术涉及一种土壤线虫群落基因组提取方法该具体过程为:将提取的土壤线虫悬液于-20℃冷冻10-20分钟后于室温下解冻,将线虫悬浮液离心,弃除上清液;向留有线虫沉淀的离心管中加入DNA提取液和蛋白酶K,37℃;向将保温消化的线虫溶液中加入等体积的苯酚、氯仿和异戊醇的混合液,离心;所述线虫溶液在4℃离心,以12000rp/m的速度离心10-12分钟;吸取上清液于新管中再加入1/5倍体积的醋酸钠和2倍体积无水乙醇混合;向留有沉淀的离心管中加入70%乙醇洗涤DNA1-2次,离心;所得土壤线虫DNA自然风干后将其溶于灭菌双蒸水于-20℃冷冻保存,减少对后续实验的干扰。本发明专利技术采用物理、化学、酶法相结合方法对线虫细胞进行裂解,提高了线虫群落样品基因组DNA提取效果。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种土壤线虫群落基因组提取方法,其特征在于,该具体过程为:步骤a,将提取的土壤线虫悬液于‑20℃冷冻10‑20分钟后于室温下解冻,将线虫悬浮液离心,弃除上清液;步骤b,向留有线虫沉淀的离心管中加入DNA提取液和蛋白酶K,37℃,150rp/min震荡1‑2小时进行保温消化;步骤c,向将保温消化的线虫溶液中加入等体积的苯酚、氯仿和异戊醇的混合液,离心,将上清液转移至另一新管中;所述线虫溶液在4℃离心,以12000rp/m的速度离心10‑12分钟;步骤d,吸取上清液于新管中再加入1/5倍体积的醋酸钠和2倍体积无水乙醇混合,于4℃静置2小时,再以4℃,14000rp/min离心20分钟,弃除上清液,沉淀即为土壤线虫DNA;步骤e,向留有沉淀的离心管中加入70%乙醇洗涤DNA1‑2次,离心,弃除上清液;步骤f,自然晾干后,向离心管中加入无菌双蒸水溶解DNA,冷冻保存;所得土壤线虫DNA自然风干后将其溶于灭菌双蒸水于‑20℃冷冻保存,减少对后续实验的干扰。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:冯纪年陈菲菲李文海张金龙
申请(专利权)人:西北农林科技大学
类型:发明
国别省市:陕西;61

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