本发明专利技术公开了一种鸡肠道抗菌肽的提取方法，它包括如下具体步骤：（1）取肠黏膜和菌株；(2)抗菌肽粗制品的制备；(3)抗菌肽粗制品的纯化。该提取方法简单易懂，提取的抗菌肽广泛存在于生物体中，具有抗菌、抗病毒、杀寄生虫、抗肿瘤等活性，是先天性免疫系统极其重要的组成成分，可以抵抗外来微生物的入侵。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了一种，它包括如下具体步骤：（1）取肠黏膜和菌株；(2)抗菌肽粗制品的制备；(3)抗菌肽粗制品的纯化。该提取方法简单易懂，提取的抗菌肽广泛存在于生物体中，具有抗菌、抗病毒、杀寄生虫、抗肿瘤等活性，是先天性免疫系统极其重要的组成成分，可以抵抗外来微生物的入侵。【专利说明】
本专利技术属于抗菌肽的提取方法，具体涉及一种。
技术介绍
抗菌肽原指昆虫体内经诱导而产生的一类分子量在4KD左右，具有抗菌活性的碱性多肽物质。迄今为止，在不同动物组织中已发现了很多具有抗菌作用的蛋白质和多肽，已有70多种抗菌多肽的结构被测定，抗菌肽的概念得到了极大的扩展。抗菌肽是生物体内诱导表达具有广谱抗菌活性的小分子多肽，这些多肽是生物体非专一性的免疫应答产物，是生物体内免疫系统的重要成分。最近研究发现，抗菌肽在机体肠道黏膜天然免疫中具有特殊意义，是抗菌免疫的直接效应分子，消化道抗菌肽主要由黏膜上皮细胞产生，在保护整个消化道黏膜完整，调节微生物区系平衡等方面发挥重要作用。目前提取抗菌肽的方法为硫酸铵沉淀法，由于肠道中含杂蛋白种类繁多，抗菌肽在生物体组织中含量较低，分离和纯化比较困难，硫酸铵沉淀法比较复杂。
技术实现思路
为了克服现有
存在的上述问题，本专利技术的目的在于，提供一种，解决目前提取抗菌肽的方法比较复杂，分离和纯化比较困难的问题。本专利技术提供的，它包括如下具体步骤:(O 取肠黏膜和菌株:取某鸡场饲养的60日龄三黄鸡的鸡肠黏膜、大肠杆菌菌株； (2)抗菌肽粗制品的制备:取新鲜鸡肠黏膜用灭菌生理盐水冲洗，经组织捣碎机捣碎后按1:1比例加入5%乙酸，100°C水浴lOmin，迅速冷却后4°C、8000r/min离心30min，取上清超声波裂解30s，4°C搅拌浸提24h后重复上述离心过程，取上清，调整pH7.0值，再次离心，上清液冷冻干燥； (3)抗菌肽粗制品的纯化:将上清液上样于SephadexG-50过滤层析柱,用0.1mol/L乙酸钠溶液，pH7.0进行洗脱，恒流泵的速度为3X1，紫外检测仪检测其在280nm处的吸光值，记录仪记录，量程200mV，纸速度为6cm/h，自动部分收集器收集，每管约2ml，检测各收集管洗脱液对大肠杆菌的抑菌活性，收集有抑菌作用的洗脱液，用截留分子量为IOKD的超滤离心管于5000g条件下离心30min，有抑菌活性的滤过过滤层析与超滤离心，将上清液上样于SephadexG-50过滤层析柱,用0.lmol/L乙酸钠溶液，pH7.0进行洗脱,物冷冻干燥，-20°C保存。本专利技术提供的，其有益效果在于，该提取方法简单易懂，提取的抗菌肽广泛存在于生物体中，具有抗菌、抗病毒、杀寄生虫、抗肿瘤等活性，是先天性免疫系统极其重要的组成成分，可以抵抗外来微生物的入侵。【具体实施方式】下面结合实施例，对本专利技术提供的，进行详细的说明。实施例本实施例的，它包括如下具体步骤: (O 取肠黏膜和菌株:取某鸡场饲养的60日龄三黄鸡的鸡肠黏膜、大肠杆菌菌株； (2)抗菌肽粗制品的制备:取新鲜鸡肠黏膜用灭菌生理盐水冲洗，经组织捣碎机捣碎后按1:1比例加入5%乙酸，100°C水浴lOmin，迅速冷却后4°C、8000r/min离心30min，取上清超声波裂解30s，4°C搅拌浸提24h后重复上述离心过程，取上清，调整pH7.0值，再次离心，上清液冷冻干燥； (3)抗菌肽粗制品的纯化:将上清液上样于SephadexG-50过滤层析柱,用0.1mol/L乙酸钠溶液，pH7.0进行洗脱，恒流泵的速度为3X1，紫外检测仪检测其在280nm处的吸光值，记录仪记录，量程 200mV，纸速度为6cm/h，自动部分收集器收集，每管约2ml，检测各收集管洗脱液对大肠杆菌的抑菌活性，收集有抑菌作用的洗脱液，用截留分子量为IOKD的超滤离心管于5000g条件下离心30min，有抑菌活性的滤过过滤层析与超滤离心，将上清液上样于SephadexG-50过滤层析柱,用0.lmol/L乙酸钠溶液，pH7.0进行洗脱,物冷冻干燥，-20°C保存。【权利要求】1.一种，其特征在于:它包括如下具体步骤: 一、取肠黏膜和菌株:取某鸡场饲养的60日龄三黄鸡的鸡肠黏膜、大肠杆菌菌株； 二、抗菌肽粗制品的制备:取新鲜鸡肠黏膜用灭菌生理盐水冲洗，经组织捣碎机捣碎后按1:1比例加入5%乙酸，100°C水浴lOmin，迅速冷却后4°C、8000r/min离心30min，取上清超声波裂解30s，4°C搅拌浸提24h后重复上述离心过程，取上清，调整pH7.0值，再次离心，上清液冷冻干燥； 三、抗菌肽粗制品的纯化:将上清液上样于SephadexG-50过滤层析柱,用0.lmol/L乙酸钠溶液，PH7.0进行洗脱，恒流泵的速度为3X1，紫外检测仪检测其在280nm处的吸光值，记录仪记录，量程200mV，纸速度为6cm/h，自动部分收集器收集，每管约2ml，检测各收集管洗脱液对大肠杆菌的抑菌活性，收集有抑菌作用的洗脱液，用截留分子量为IOKD的超滤离心管于5000g条件下离心30min，有抑菌活性的滤过过滤层析与超滤离心，将上清液上样于SephadexG-50过滤层 析柱，用0.lmol/L乙酸钠溶液，pH7.0进行洗脱，物冷冻干燥，_20°C保存。【文档编号】C07K1/36GK103880917SQ201210553288【公开日】2014年6月25日 申请日期:2012年12月19日 优先权日:2012年12月19日 【专利技术者】张述智, 夏伟, 朱绍辉, 张 浩, 王晓丽, 徐权汗, 李之详, 许团辉 申请人:青岛中仁药业有限公司本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种鸡肠道抗菌肽的提取方法，其特征在于：它包括如下具体步骤：一、取肠黏膜和菌株：取某鸡场饲养的60日龄三黄鸡的鸡肠黏膜、大肠杆菌菌株；二、抗菌肽粗制品的制备：取新鲜鸡肠黏膜用灭菌生理盐水冲洗，经组织捣碎机捣碎后按1：1比例加入5%乙酸，100℃水浴10min，迅速冷却后4℃、8000r/min离心30min，取上清超声波裂解30s，4℃搅拌浸提24h后重复上述离心过程，取上清，调整pH7.0值，再次离心，上清液冷冻干燥；三、抗菌肽粗制品的纯化：将上清液上样于SephadexG‑50过滤层析柱，用0.1mol/L乙酸钠溶液，pH7.0进行洗脱，恒流泵的速度为3×1，紫外检测仪检测其在280nm处的吸光值，记录仪记录，量程200mV，纸速度为6cm/h，自动部分收集器收集，每管约2ml，检测各收集管洗脱液对大肠杆菌的抑菌活性，收集有抑菌作用的洗脱液，用截留分子量为l0KD的超滤离心管于5000g条件下离心30min，有抑菌活性的滤过过滤层析与超滤离心，将上清液上样于SephadexG‑50过滤层析柱，用0.1mol/L乙酸钠溶液，pH7.0进行洗脱，物冷冻干燥，‑20℃保存。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：张述智，夏伟，朱绍辉，张浩，王晓丽，徐权汗，李之详，许团辉，
申请(专利权)人：青岛中仁药业有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37
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