重组成对碱性氨基酸蛋白酶的制剂制造技术

本申请提供成对碱性氨基酸蛋白酶(例如，重组成对碱性氨基酸蛋白酶)的稳定化制剂，所述制剂含有糖、糖醇、和/或非离子型表面活性剂。与非稳定化组合物相比，本发明专利技术所公开的成对碱性氨基酸蛋白酶制剂在储存和/或经受机械应力时保留较大量的成对碱性氨基酸蛋白酶活性和单体成对碱性氨基酸蛋白酶含量，同时减少成对碱性氨基酸蛋白酶聚集。还提供用于稳定地稀释成对碱性氨基酸蛋白酶(例如，重组成对碱性氨基酸蛋白酶)组合物的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】重组成对碱性氨基酸蛋白酶的制剂相关申请的交叉引用本申请要求2011年6月2日提交的美国临时申请号61/492,712的权益，出于所有的目的，所述申请的内容明确地以引用的方式整体并入本文。应用领域本申请总体上涉及蛋白质制剂的领域。专利技术背景蛋白水解哺乳动物枯草杆菌蛋白酶样蛋白原转化酶(SPC或PC)家族与细菌枯草杆菌蛋白酶和酵母Kex2p同源。迄今为止，已经鉴别出SPC家族的七个不同成员，包括成对碱性氨基酸蛋白酶(furin)、PC1(还称为PC3)、PC2、PACE4、PC4、PC5(还称为PC6)、PC7(LPC、PC8、或SPC7)，其各自展现出独特的组织分布。成对碱性氨基酸蛋白酶，还称为PACE(成对碱性氨基酸裂解酶)普遍表达于所有哺乳动物组织和细胞系中，并且能够加工分泌途径中的广泛范围的生物活性前体蛋白，还包括激素、生长因子、受体、病毒和细菌蛋白、以及血浆蛋白。它是结构上安排成几个域的钙依赖性丝氨酸内切蛋白酶，所述域即信号肽、前肽、催化结构域、中间结构域(还称为homo-B或P结构域)、C末端定位的富含半胱氨酸的结构域、跨膜结构域以及胞质尾区。成对碱性氨基酸蛋白酶的蛋白酶裂解位点包含识别序列，其特征为氨基酸序列Arg-X-Lys/Arg-Arg(Hosaka等,JBiolChem.1991;266:12127-30)。成对碱性氨基酸蛋白酶属于蛋白原转化酶家族并且依赖于钙(Ca2+)。成对碱性氨基酸蛋白酶特异性地裂解在1位和4位处含有精氨酸的特定序列内的C末端的精氨酸肽键。这种序列可以在许多人蛋白质中发现，从而表明成对碱性氨基酸蛋白酶在多种人蛋白原的成熟过程中起着重要作用。因此，成对碱性氨基酸蛋白酶是将潜在的前体蛋白加工成其生物活性产物的蛋白原转化酶。成对碱性氨基酸蛋白酶是使前体蛋白在其成对碱性氨基酸加工位点处裂解的钙依赖性丝氨酸内切蛋白酶。成对碱性氨基酸蛋白酶的一种底物是冯·维勒布兰德(vonWillebrand)因子(vWF)。成对碱性氨基酸蛋白酶(例如，重组成对碱性氨基酸蛋白酶)能够通过裂解VWF的Arg741-Ser742肽键来将前VWF(原冯·维勒布兰德因子)转化成成熟VWF。这一成熟步骤是(例如)提供冯·维勒布兰德病B型的疗法的rVWF产生过程的一部分。活化重组蛋白质的产生具有高度临床和诊断重要性。例如，活性或成熟蛋白质(像成熟VWF)可以用于控制凝血。成对碱性氨基酸蛋白酶制剂，特别是重组成对碱性氨基酸蛋白酶(recombinantfurin)(重组成对碱性氨基酸蛋白酶(rfurin))制剂经常由于来自蛋白质降解(经常来自成对碱性氨基酸蛋白酶蛋白质的自身裂解)的重组成对碱性氨基酸蛋白酶活性损失而具有较短的保质期(少于6个月)。此外，当用于某些产生过程(如产生成熟vWF)时，重组成对碱性氨基酸蛋白酶制剂经常被稀释200倍，并且稀释的重组成对碱性氨基酸蛋白酶通常显示不成比例的活性损失。因此，在本领域中需要使成对碱性氨基酸蛋白酶(例如，重组成对碱性氨基酸蛋白酶)组成物稳定化的方法和制剂，以及用于稀释浓成对碱性氨基酸蛋白酶(例如，重组成对碱性氨基酸蛋白酶)组合物而不损失大部分成对碱性氨基酸蛋白酶活性的方法。专利技术概述通过提供用于使成对碱性氨基酸蛋白酶(例如，重组成对碱性氨基酸蛋白酶组合物)稳定化的方法和制剂，本公开实现了成对碱性氨基酸蛋白酶(例如，重组成对碱性氨基酸蛋白酶)配制、储存、以及操作领域中的这些和其它需求。通过添加糖、糖醇和/或非离子型表面活性剂显著增加成对碱性氨基酸蛋白酶(例如，重组成对碱性氨基酸蛋白酶)组合物在储存和机械应力过程中的稳定性的发现，使这些需求至少部分地得到满足。因此，本专利技术提供高度稳定化的成对碱性氨基酸蛋白酶制剂，特别是高度稳定化的重组成对碱性氨基酸蛋白酶制剂，所述重组成对碱性氨基酸蛋白酶制剂与起始(对照)成对碱性氨基酸蛋白酶制剂相比在高温、搅拌以及不同pH条件下显示出增加的稳定性。一方面，本公开提供一种重组成对碱性氨基酸蛋白酶(recombinantfurin)(重组成对碱性氨基酸蛋白酶(rfurin))的稳定化水性组合物，所述组合物包含：8,000U/mL至500,000U/mL重组成对碱性氨基酸蛋白酶；100mM至300mM药学上可接受的盐；0.5mM至2mM钙；2%至20%糖或糖醇；10ppm至200ppm非离子型表面活性剂；10mM至200mM缓冲剂；以及5.5至7.5的pH。在一个实施方案中，以上所提供的组合物包含150mM至250mM药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，以上所提供的组合物包含190±10mM药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，以上所提供的组合物包含190mM药学上可接受的盐。在以上所提供的组合物的一个实施方案中，药学上可接受的盐是氯化钠。在以上所提供的组合物的另一个实施方案中，药学上可接受的盐是氯化钾。在一个实施方案中，以上所提供的组合物包含0.9±0.2mM钙。在另一个实施方案中，以上所提供的组合物包含0.92mM钙。在一个实施方案中，以上所提供的组合物包含5%至15%糖或糖醇。在另一个实施方案中，以上所提供的组合物包含10±2%糖或糖醇。在另一个实施方案中，以上所提供的组合物包含10%糖或糖醇。在以上所提供的组合物的一个实施方案中，糖或糖醇选自由蔗糖、海藻糖、甘露糖醇、以及其组合组成的组。在以上所提供的组合物的另一个实施方案中，糖或糖醇是海藻糖。在以上所提供的组合物的另一个实施方案中，糖或糖醇是蔗糖。在一个实施方案中，以上所提供的组合物包含10ppm至100ppm非离子型表面活性剂。在另一个实施方案中，以上所提供的组合物包含50ppm至100ppm非离子型表面活性剂。在另一个实施方案中，以上所提供的组合物包含75ppm非离子型表面活性剂。在以上所提供的组合物的一个实施方案中，非离子型表面活性剂是聚山梨酯80。在一个实施方案中，以上所提供的组合物包含50mM至150mM缓冲剂。在另一个实施方案中，以上所提供的组合物包含90±10mM缓冲剂。在另一个实施方案中，以上所提供的组合物包含91mM缓冲剂。在以上所提供的组合物的一个实施方案中，缓冲剂包含乙酸盐。在以上所提供的组合物的另一个实施方案中，缓冲剂包含HEPES。在以上所提供的组合物的另一个实施方案中，缓冲剂包含MES。在以上所提供的组合物的另一个实施方案中，缓冲剂包含乙酸盐和HEPES。在一个实施方案中，以上所提供的组合物包含25mM至75mM乙酸盐和25mM至75mMHEPES。在另一个实施方案中，以上所提供的组合物包含45±5mM乙酸盐和45±5mMHEPES。在另一个实施方案中，以上所提供的组合物包含45mM乙酸盐和46mMHEPES。在一个实施方案中，以上所提供的组合物具有5.5至7.0的pH。在另一个实施方案中，以上所提供的组合物具有5.5至6.5的pH。在另一个实施方案中，以上所提供的组合物具有6.0±0.2的pH。在另一个实施方案中，以上所提供的组合物具有6.0的pH。在以上所提供的组合物的一个实施方案中，组合物与不含糖或糖醇的重组成对碱性氨基酸蛋白酶组合物相比在于37℃下储存时具有增加的稳定性。在以上所提供的组合物的一个实施方案中，组合物与不含糖或糖本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种重组成对碱性氨基酸蛋白酶(recombinant furin)(重组成对碱性氨基酸蛋白酶(rfurin))的稳定化水性组合物，所述组合物包含：(a)8,000U/mL至500,000U/mL重组成对碱性氨基酸蛋白酶；(b)100mM至300mM药学上可接受的盐；(c)0.5mM至2mM钙；(d)2%至20%糖或糖醇；(e)10ppm至200ppm非离子型表面活性剂；(f)10mM至200mM缓冲剂；以及(g)5.5至7.5的pH。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2011.06.02 US 61/492,7121.一种重组成对碱性氨基酸蛋白酶rfurin的稳定化水性组合物，所述组合物包含：(a)8,000U/mL至500,000U/mL重组成对碱性氨基酸蛋白酶；(b)100mM至300mM药学上可接受的盐；(c)0.5mM至2mM钙；(d)2％w/w至20％w/w糖或糖醇，其中所述糖或糖醇选自由以下各项组成的组：蔗糖、海藻糖、甘露糖醇、以及其组合；(e)10ppm至200ppm非离子型表面活性剂，其中所述非离子型表面活性剂选自由以下各项组成的组：聚山梨酯20、聚山梨酯40、聚山梨酯60、聚山梨酯80以及普朗尼克多元醇；(f)10mM至200mM缓冲剂；以及(g)5.5至7.5的pH。2.如权利要求1所述的组合物，其包含150mM至250mM药学上可接受的盐。3.如权利要求2所述的组合物，其包含190±10mM药学上可接受的盐。4.如权利要求3所述的组合物，其包含190mM药学上可接受的盐。5.如权利要求1至4中任一项所述的组合物，其中所述药学上可接受的盐是氯化钠。6.如权利要求1至4中任一项所述的组合物，其中所述药学上可接受的盐是氯化钾。7.如权利要求1至4中任一项所述的组合物，其包含0.9±0.2mM钙。8.如权利要求7所述的组合物，其包含0.92mM钙。9.如权利要求1至4中任一项所述的组合物，其包含5％w/w至15％w/w糖或糖醇。10.如权利要求9所述的组合物，其包含10±2％w/w糖或糖醇。11.如权利要求10所述的组合物，其包含10％w/w糖或糖醇。12.如权利要求1至4中任一项所述的组合物，其中所述糖或糖醇是海藻糖。13.如权利要求1至4中任一项所述的组合物，其中所述糖或糖醇是蔗糖。14.如权利要求1至4中任一项所述的组合物，其包含10ppm至100ppm非离子型表面活性剂，其中所述非离子型表面活性剂选自由以下各项组成的组：聚山梨酯20、聚山梨酯40、聚山梨酯60、聚山梨酯80以及普朗尼克多元醇。15.如权利要求14所述的组合物，其包含50ppm至100ppm非离子型表面活性剂，其中所述非离子型表面活性剂选自由以下各项组成的组：聚山梨酯20、聚山梨酯40、聚山梨酯60、聚山梨酯80以及普朗尼克多元醇。16.如权利要求15所述的组合物，其包含75ppm非离子型表面活性剂，其中所述非离子型表面活性剂选自由以下各项组成的组：聚山梨酯20、聚山梨酯40、聚山梨酯60、聚山梨酯80以及普朗尼克多元醇。17.如权利要求1至4中任一项所述的组合物，其中所述非离子型表面活性剂是聚山梨酯80。18.如权利要求1至4中任一项所述的组合物，其包含50mM至150mM缓冲剂。19.如权利要求18所述的组合物，其包含90±10mM缓冲剂。20.如权利要求19所述的组合物，其包含91mM缓冲剂。21.如权利要求1至4中任一项所述的组合物，其中所述缓冲剂包含乙酸盐。22.如权利要求1至4中任一项所述的组合物，其中所述缓冲剂包含HEPES。23.如权利要求1至4中任一项所述的组合物，其中所述缓冲剂包含MES。24.如权利要求1至4中任一项所述的组合物，其中所述缓冲剂包含乙酸盐和HEPES。25.如权利要求24所述的组合物，其包含25mM至75mM乙酸盐和25mM至75mMHEPES。26.如权利要求25所述的组合物，其包含45±5mM乙酸盐和45±5mMHEPES。27.如权利要求26所述的组合物，其包含45mM乙酸盐和46mMHEPES。28.如权利要求1至4中任一项所述的组合物，其具有5.5至7.0的pH。29.如权利要求28所述的组合物，其具有5.5至6.5的pH。30.如权利要求29所述的组合物，其具有6.0±0.2的pH。31.如权利要求30所述的组合物，其具有6.0的pH。32.如权利要求1至4中任一项所述的组合物，其中所述组合物在于37℃下储存时与不包含糖或糖醇的重组成对碱性氨基酸蛋白酶组合物相比具有增加的稳定性。33.如权利要求32所述的组合物，其中所述组合物在于37℃下储存时与不包含糖或糖醇的重组成对碱性氨基酸蛋白酶组合物相比维持较高的重组成对碱性氨基酸蛋白酶活性百分比。34.如权利要求32所述的组合物，其中所述组合物在于37℃下储存时与不包含糖或糖醇的重组成对碱性氨基酸蛋白酶组合物相比维持较高的重组成对碱性氨基酸蛋白酶单体含量百分比。35.如权利要求1至4中任一项所述的组合物，其中所述组合物在搅拌时与不包含非离子型表面活性剂的重组成对碱性氨基酸蛋白酶组合物相比具有增加的稳定性，其中所述非离子型表面活性剂选自由以下各项组成的...

【专利技术属性】
技术研发人员：M·哈斯拉赫尔，A·齐特科维兹，C·怀特，K·弗兰克，
申请(专利权)人：巴克斯特国际公司，巴克斯特保健股份有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US