三氯生衍生物及其用途制造技术

一种用于选择性抑制在靶细胞和非靶细胞的混合群体中的非靶细胞的包含三氯生衍生物的选择剂。优选地，所述三氯生衍生物是糖苷衍生物，更优选地是吡喃糖苷衍生物。合适地提供了包含所述选择剂的选择性培养基以及使用所述选择剂培养细胞的方法。

【技术实现步骤摘要】
三氯生衍生物及其用途
本专利技术涉及三氯生衍生物及其用途，特别是包含三氯生衍生物的选择剂和含有三氯生衍生物的选择性培养基。本专利技术还涉及使用包含三氯生衍生物的选择剂选择性抑制混合群体中的特定细胞的生长的方法以及用于进行此类方法的试剂盒。
技术介绍
对本专利技术背景的下列论述旨在促进对本专利技术的理解。然而，应理解，该论述不是认可或承认提及的任何材料在本申请的优先权日期时在任何权限下被公布、为人所知或是本领域技术人员的常见一般知识的一部分。广谱抗微生物剂5-氯-2-(2,4-二氯苯氧基)苯酚（也称为“三氯生”或其是CibaSpecialtyChemical的三氯生的商标名）自19世纪70年代早期开始已常用于个人卫生用品（包括肥皂、牙膏、除臭剂）以及用于家用和工业清洁产品。尽管在高浓度下三氯生是杀虫剂，其在较低水平下起抑菌剂的作用。尽管有抗微生物用途的悠久历史，但是三氯生通常不单独用作区分培养基中用于特定细菌物种的优先生长的选择剂。Toora的美国专利5447849教导了头孢磺啶和三氯生的组合用于选择性生长小肠结肠炎耶尔森氏菌的用途。Russell的美国专利5741663教导了与羧苄青霉素和呋喃妥因组合的三氯生用于选择性生长荧光假单胞菌的用途。Good等人的美国专利申请公布2010/0278847教导了将100nM至10μM范围内的三氯生添加至培养基（其还补充有氨苄青霉素）以用于区分基因改造的（转化的）大肠杆菌，所述大肠杆菌显示载体介导的对于烯酰基-ACP还原酶（fab1）基因的表达。Good等人没有公开涉及通常在环境、工业或医学样本中发现的类型的天然存在的细菌和/或真菌的培养物。
技术实现思路
根据本专利技术的第一方面提供了用于选择性抑制靶细胞和非靶细胞的混合群体中的非靶细胞的包含三氯生衍生物的选择剂。在整篇说明书和权利要求书中，除非上下文另有需要，否则应理解词语“包括（comprise）”或变型诸如“包含（comprises）”或“包含（comprising）”意味着包含所述的整数或整数组而不排除任何其它整数或整数组。混合群体为在环境、工业和/或临床样本中发现的类型。可在无其它抗生素、抑制染料、生物杀灭剂或抑菌剂的情况下使用所公开的三氯生衍生物。采集时微生物存在的条件以及运输环境、工业和/或医学样本的条件一般是受胁迫（stressed，应激）的和潜在危害性的。因此，样本中的靶微生物可具有对抗生素和其它抑制剂的减弱的抗性，并且在恢复正常生长之前往往需要延长的迟滞期。很多实验室的标准实践是使样本在不含抗生素的营养生长培养基中经受预富集培养一段足以促进靶微生物恢复的时间，例如约16小时。然而，靶细胞往往以低于非靶微生物的数量存在并且预富集培养可加剧这种不平衡，导致非靶微生物的生长过度以及掩蔽靶微生物。因为本专利技术的三氯生衍生物和含有此类三氯生衍生物的组合物允许在无抗生素或其它生物杀灭剂下培养，所以对于大多数样本来说，排除预富集培养的需要，这样节省了时间，并且减少与进行预富集恢复培养的额外处理样本相关的风险。本专利技术还提供三氯生衍生物作为用于选择性抑制靶细胞和非靶细胞的混合群体中的非靶细胞的选择剂的用途。本文所用的关于三氯生的术语“衍生物”一般是指直接或通过修饰或部分取代由三氯生衍生的化学物质。细胞可以是真核细胞（例如哺乳动物细胞、真菌细胞或酵母细胞），但是更通常是细菌细胞。特别地，所述靶细胞和所述非靶细胞通常均包含细菌。本文所用的术语“抑制”一般是指通过减少、减缓或终止细胞的生长而抑制细胞的生长。如本文所用，“生长”是指尺寸增加或增殖或两者兼有。因此，本专利技术的化合物可通过杀死、抑制细胞变大而抑制它们，和/或可预防细胞区分和复制和数量增加。总体而言，此类抑制预防活细胞数量的任何净增加。在优选的实施方式中，选择剂是用于包含在细菌生长培养基中的组合物。优选地，三氯生衍生物是三氯生的糖苷衍生物。换句话说，选择剂是其中糖苷配基（aglycone）是三氯生的糖苷。糖部分经由O-键结合于三氯生部分。三氯生结合于碳水化合物部分的异头碳。优选地，三氯生的糖苷衍生物是吡喃糖苷衍生物（即三氯生的吡喃葡萄糖苷）。换句话说，糖苷的糖基（glycone）部分（即糖部分）包括吡喃糖环。在优选的实施方式中，所述三氯生糖苷衍生物选自：三氯生-α-D-吡喃阿拉伯糖苷，三氯生-β-D-吡喃阿拉伯糖苷，三氯生-α-D-吡喃半乳糖苷，三氯生-β-D-吡喃半乳糖苷，三氯生-α-D-吡喃葡萄糖苷，三氯生-β-D-吡喃葡萄糖苷，和三氯生-α-D-吡喃甘露糖苷。在优选的实施方式中，选择剂具有通式（I）：其中R1是糖基（即R1是糖部分）。优选地R1基团包括吡喃糖环。在优选的实施方式中，可使用选择剂，其中，当所述选择剂与非靶细胞接触时对非靶细胞产生毒性作用，而当所述选择剂与靶细胞接触时对靶细胞不产生毒性作用。本专利技术的选择剂可用于希望造成对部分细胞混合群体的抑制的情形的任何方式中。当所述选择剂与非靶细胞接触时适当地抑制非靶细胞的生长，但是当与无论是否受胁迫的靶细胞接触时基本上对靶细胞无抑制作用。当细菌细胞置于适合的生长介质中时，存在“迟滞期”，在迟滞期期间活细菌细胞的净数量不增加，或仅缓慢增加。迟滞期后，培养进入指数生长期，在指数生长期期间平均“世代时间”（即，多个细胞从形成到分裂所花的平均时间）是最短的。对于被认为是‘基本上无抑制作用’的说明，选择剂在特定浓度下通常被认为是对靶细胞基本上无抑制作用，如果其在迟滞期中导致少于25%，优选地少于20%，更优选地少于15%的增加，并且如果其在指数生长期期间导致平均世代时间的少于20%、优选地少于10%、更优选地少于5%的增加。在特别优选的实施方式中，所述选择剂用于其中靶细胞是沙门氏菌属多个种（Salmonellaspp.）且非靶细胞是大肠杆菌（E.coli）和/或其它大肠菌群的情形。选择剂允许沙门氏菌菌株生长，同时抑制（即防止活细胞数量的任何净增加）竞争者大肠菌群生物体。选择剂对沙门氏菌菌株，即使在受胁迫状态下的菌株）无抑制作用。因此，可能减少沙门氏菌菌株（如果在原始样本中存在的话）达到在测定其存在的任何测定法（例如ELISA、PCR等）中得到阳性结果所需的细胞密度所需的总培养时间，因为这些菌株的生长未被抑制。在备选实施方式中，所述选择剂用于其中靶细胞是弯曲杆菌属多个种（Campylobacterspp.）的情形。换句话说，选择剂对弯曲杆菌属多个种具有选择性。还提供了用于选择性抑制靶细胞和非靶细胞的混合群体中的非靶细胞的培养基，所述培养基包含如上所定义的选择剂。所述选择性培养基通常是提供对非靶细胞和靶细胞的混合群体中的非靶细胞的抑制的培养基。所述培养基可以是液体或固体并且可包含常规地且适合地包含于培养基中的任何组分，例如营养基质、蛋白胨、酵母提取物、糖（或其它固化剂）、盐、缓冲液、指示剂用染料等。优选地，以抑制非靶细胞的有效量提供所述选择剂。所述培养基可包括适合的诱导剂。使用适合的诱导剂则增加所述选择剂的抑制活性。合适的诱导剂包括甲基糖苷、异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷、对硝基苯基-α-L-吡喃阿拉伯糖苷或对硝基苯基-β-D-吡喃木糖苷。在所述培养基中，以允许靶细胞生长、同时抑制非靶细胞的合适浓度提供所述选择剂。本专利技术还适合地本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于选择性抑制在靶细胞和非靶细胞的混合群体中的非靶细胞的包含三氯生衍生物的选择剂，其中所述三氯生衍生物是三氯生的糖苷衍生物。

【技术特征摘要】
2012.12.21 GB 1223309.41.一种用于选择性抑制在靶细胞和非靶细胞的混合群体中的非靶细胞的选择性培养基，所述选择性培养基包括包含三氯生衍生物的选择剂，其中所述三氯生衍生物是三氯生的糖苷衍生物，且其中所述靶细胞是沙门氏菌属，并且所述非靶细胞是大肠杆菌和/或其它大肠菌群，其中所述三氯生糖苷衍生物选自：三氯生-α-D-吡喃阿拉伯糖苷、三氯生-β-D-吡喃阿拉伯糖苷、三氯生-α-D-吡喃半乳糖苷、三氯生-β-D-吡喃半乳糖苷、三氯生-α-D-吡喃葡萄糖苷、三氯生-β-D-吡喃葡萄糖苷，和三氯生-α-D-吡喃甘露糖苷，并且，其中以抑制所述非靶细胞的有效量提供所述选择剂。2.根据权利要求1所述的选择性培养基，其中，当所述选择剂与非靶细胞接触时对非靶细胞产生毒性作用，而当所述选择剂与靶细胞接触时对靶细胞不产生毒性作用。3.根据前述权利要求的任一项所述的选择性培养基，其中，当所述选择剂与非靶细胞接触时抑制非...

【专利技术属性】
技术研发人员：理查德·博维尔，吉马·豪斯，
申请(专利权)人：奥克索伊德有限公司，
类型：发明
国别省市：英国;GB