使用脐带组织来源的细胞治疗外周血管疾病制造技术

本发明专利技术公开了在外周血管疾病患者中使用来源于脐带组织的细胞来刺激和支持血管生成，改善血流，再生、修复和改善由外周局部缺血性事件引起的骨骼肌损伤，以及保护骨骼肌免受局部缺血性损伤的组合物和方法。具体地，公开了用脐来源的细胞和纤维蛋白胶来治疗患有外周血管疾病的患者的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】使用脐带组织来源的细胞治疗外周血管疾病相关申请的交叉引用本申请是提交于2006年12月28日的美国专利申请11/617,346的部分继续申请，该美国专利申请要求提交于2005年12月28日的美国临时专利申请60/754,366的权益，以上专利内容全文以引用方式并入本文。
本专利技术涉及基于细胞的领域或针对外周血管疾病患者，尤其是患有外周局部缺血的那些患者的再生疗法。具体地，本专利技术提供了来源于脐带组织的细胞，其具有刺激和支持血管生成，改善血流，再生、修复和改善由外周局部缺血性事件引起的骨骼肌损伤，以及保护骨骼肌免受局部缺血性损伤的能力。
技术介绍
本说明书通篇引用了包括专利、已公布的申请、技术文献和学术文献的多种出版物。这些引用的出版物各自全文以引用方式并入本文。外周血管疾病(PVD)可由血管，特别是四肢和远离心脏的区域的动脉硬化闭塞引起，从而导致血流减慢和对该闭塞下游附近组织不充足的氧灌注。PVD经常表现在髂血管、股骨血管和腘血管、以及锁骨下血管中，并且血栓、梗塞或创伤可使其作用加剧。据估计，在美国大约800至1200万的个体，尤其是老年人群和患有糖尿病的那些个体受到PVD的折磨。PVD的常见症状包括上下肢和肢体的痉挛、麻木、虚弱、肌肉疲劳、四肢与肢体的疼痛、四肢与肢体的低温、肢体变色、干燥或鳞状皮肤、以及高血压。最常见的症状是在诸如散步的某种锻炼方式期间发生的跛行或疼痛的感觉、神经紧张、以及闭塞血管下游肌肉的疲劳，但休息一段时间后，这些症状可自我消退。从病理生理学方面来讲，闭塞的血管引起阻塞部位和阻塞远侧处组织的局部缺血。该局部缺血一般被称为外周局部缺血，这句话的意思是局部缺血发生在远离心脏的位置。局部缺血的严重程度是阻塞的大小和数量、阻塞是否靠近肌肉或器官、以及是否存在足够多余血管的函数。在更严重的案例中，局部缺血导致受影响组织的死亡，并且可导致受影响四肢的截肢或甚至患者的死亡。目前用于治疗更严重的PVD案例的方法包括化疗方案、血管成形术、插入支架、重建外科手术、旁路移植术、切除受影响组织、或截肢。遗憾的是，对于许多患者，此类干预仅显示出有限的成功，并且许多患者经历了病症或症状的恶化。现在，人们关注的是使用可分裂和分化的干细胞，或者其它来源的肌肉细胞(包括平滑肌细胞和骨骼肌细胞)来协助修复或逆转组织损伤。干细胞移植可用作重构靶组织从而恢复生理和结构功能的临床工具。干细胞技术的应用非常广泛，包括组织工程、基因治疗递送和细胞疗法，即，生物治疗剂经由产生或包含这些药剂的外源提供的活细胞或细胞组分递送至靶位置(综述参见Tresco，P.A.等人，(2000)AdvancedDrugDeliveryReviews42：2-37)。干细胞的鉴定推动了以用于再生医学的特定细胞类型的选择性生成为目的研究。实现干细胞技术的治疗潜能的一个障碍是难以获得足够数量的干细胞。胚胎或胎儿组织是干细胞的一种来源。已从包括人的许多哺乳动物物种分离出胚胎干细胞和祖细胞，并且已证实若干此类细胞类型能够自我更新和扩增并分化成许多不同细胞谱系。但是来源于胚胎或胎儿来源的干细胞已经引发许多伦理和道德问题，人们期望通过鉴定多潜能细胞或多能细胞的其它来源来避免这些问题。诸如脐带和胎盘的产后组织作为干细胞的替代来源已受到关注。例如，通过灌注胎盘或者从脐带血或组织收集来回收干细胞的方法已有所描述。由这些方法获得干细胞的局限性在于不能获得足够体积的脐带血或足够数量的细胞，以及从这些来源获得的细胞群存在异质性或尚未表征。此类细胞的基本上同质群体的可靠的、已充分表征的和充足的供应在修复、再生和改善骨骼肌，刺激和/或支持血管生成，以及改善继外周局部缺血性事件之后，特别是PVD患者的血流的多种诊断和治疗应用中具有优点，所述细胞具有分化成一系列骨骼肌、周细胞或血管谱系的能力。
技术实现思路
本专利技术一个方面的特征在于治疗患有外周血管疾病的患者的方法，所述方法包括向患者施用有效治疗外周血管疾病的量的脐带组织来源的细胞，其中所述脐带组织来源的细胞来源于基本上不含血的人脐带组织，其中所述细胞能够在培养中自我更新和扩增，并且具有分化成至少骨骼肌、血管平滑肌、周细胞、或血管内皮表型的细胞的潜能；其中所述细胞的生长需要L-缬氨酸并且可在至少约5％氧气下生长；其中所述细胞还包括下列特性中的至少一种：(a)在培养中至少约40倍增的潜能；(b)在涂覆或未涂覆组织培养瓶上附着和扩增，其中所述涂覆组织培养瓶包含明胶、层粘连蛋白、胶原、多鸟氨酸、玻连蛋白或纤连蛋白的涂层；(c)产生组织因子、波形蛋白和α-平滑肌肌动蛋白中的至少一种；(d)产生CD10、CD13、CD44、CD73、CD90、PDGFr-α、PD-L2和HLA-A，B，C中的至少一种；(e)不产生CD31、CD34、CD45、CD80、CD86、CD117、CD141、CD178、B7-H2、HLA-G和HLA-DR，DP，DQ中的至少一种，如通过流式细胞术检测；(f)相对于人细胞的基因表达对于编码下列的基因中的至少一种是提高的，所述人细胞是成纤维细胞、间充质干细胞或髂嵴骨髓细胞：白介素8；浆膜蛋白1；趋化因子(C-X-C基序)配体1(黑素瘤生长刺激活性，α)；趋化因子(C-X-C基序)配体6(粒细胞趋化蛋白2)；趋化因子(C-X-C基序)配体3；肿瘤坏死因子，α-诱导蛋白3；(g)相对于人细胞的基因表达对于编码下列的基因中的至少一种是降低的，所述人细胞是成纤维细胞、间充质干细胞或髂嵴骨髓细胞：矮小同源盒2；热休克27kDa蛋白2；趋化因子(C-X-C基序)配体12(基质细胞衍生因子1)；弹性蛋白(主动脉瓣上狭窄，威廉斯-博伊伦综合征)；人类(Homosapiens)mRNA；cDNADKFZp586M2022(来自克隆DKFZp586M2022)；间充质同源盒2(生长终止特异性同源盒)；sineoculis同源盒同源物1(果蝇属)晶状体蛋白，αB；形态发生紊乱关联激活因子2；DKFZP586B2420蛋白；类似于neuralin1；四连接素(纤溶酶原结合蛋白)；src同源3(SH3)和富含半胱氨酸的结构域；胆固醇25-羟化酶；runt相关转录因子3；白介素11受体，α；前胶原C-内肽酶增强子；卷曲同源物7(果蝇属)；假设基因BC008967；胶原，VIII型，α1；腱生蛋白C(hexabrachion)；易洛魁族同源盒蛋白5；膜铁转运辅助蛋白；整联蛋白，β8；突触小泡糖蛋白2；成神经细胞瘤，抑制瘤变蛋白1；胰岛素样生长因子结合蛋白2，36kDa；人类cDNAFLJ12280fis，克隆MAMMA1001744；细胞因子受体样因子1；钾中间/小电导钙活化通道，亚家族N，成员4；整联蛋白，β7；具有PDZ结合基序的转录共激活因子(TAZ)；sineoculis同源盒同源物2(果蝇属)；KIAA1034蛋白；囊泡相关膜蛋白5(肌短蛋白)；含EGF腓骨蛋白样胞外基质蛋白1；早期生长反应因子3；远端缺失同源盒5；假定蛋白FLJ20373；醛酮还原酶家族1，成员C3(3-α羟基类固醇脱氢酶，II型)；双糖链蛋白聚糖；具有PDZ结合基序的转录共激活因子(TAZ)；纤连蛋白1；前脑啡肽；整联蛋白，β样1(具有EGF样重复结构域本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种治疗患有外周血管疾病的患者的方法，所述方法包括施用药物组合物，所述药物组合物包含纤维蛋白胶和有效治疗所述疾病的量的从人脐带组织获得的分离的同质细胞群，其中所述脐带组织基本上不含血，并且其中所述分离的同质细胞群能够在培养中自我更新和扩增，具有分化的潜能且不表达CD117和/或端粒酶。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.纤维蛋白胶和从人脐带组织获得的分离的同质细胞群在制备用于在患有外周血管疾病的患者中增强再灌注的药物中的用途，其中所述脐带组织基本上不含血，并且其中所述分离的同质细胞群能够在培养中自我更新和扩增，具有分化的潜能且不表达CD117和/或端粒酶，其中所述纤维蛋白胶包含16至24IU/ml凝血酶和39.3至60.7mg/ml纤维蛋白原，以及其中所述用途包括通过肌内注射给予。2.根据权利要求1所述的用途，其中所述分离的细胞群具有下列特性中的一种或多种：(a)表达氧化低密度脂蛋白受体1、浆膜蛋白、趋化因子受体配体3、和/或粒细胞趋化蛋白；(b)不表达CD31、CD34或CD45；(c)相对于人成纤维细胞、间充质干细胞或髂嵴骨髓细胞，表达提高水平的白介素8或浆膜蛋白1；(d)具有分化成至少骨骼肌、血管平滑肌、周细胞或血管内皮表型的细胞的潜能；以及(e)表达CD10、CD13、CD44、CD73和CD90。3.根据权利要求1或2所述的用途，其中所述外周血管疾病是外周局部缺血。4.根据权利要求3所述的用途，其中所述用途包括在外周局部缺血的部位处施药。5.根据权利要求1或2所述的用途，其中所述用途包括局部给药。6.根据权利要求1或2所述的用途，其中所述用途包括通过注射、输注、在患者体内植入装置，或通过植入包含所述药物的基质或支架施药。7.根据权利要求1或2所述的用途，其中在施用之前体外诱导所述分离的细胞群分化成骨骼肌、血管肌、周细胞或血管内皮谱系。8.根据权利要求1或2所述的用途，其中所述细胞群经基因工程化以产生促进外周血管疾病治疗的基因产物。9.根据权利要求1或2所述的用途，其中所述药物还包含选自下列的药剂：抗凝血的药剂、免疫抑制剂、免疫调节剂、促进血管生成的药剂、抗凋亡的药剂、以及它们的混合物。10.根据权利要求1或2所述的用途，其中所述药物还包含至少一种其它细胞类型。11.根据权利要求10所述的用途，其中所述其它细胞类型是骨骼...

【专利技术属性】
技术研发人员：CS布恩苏塞索，AJ基姆，S德哈纳拉，R阿拉斯，I努尔，R梅德勒，L巴尔，
申请(专利权)人：德普伊新特斯产品有限责任公司，
类型：发明
国别省市：美国;US