一种抗瓜类果斑病菌的单克隆抗体及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种抗瓜类果斑病菌的单克隆抗体及其应用。本发明专利技术所提供的抗瓜类果斑病菌的单克隆抗体是由分泌瓜类果斑病菌的单克隆抗体的杂交瘤细胞株4C6分泌产生的，该小鼠杂交瘤细胞株在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCC No.8960。本发明专利技术所提供的抗瓜类果斑病菌的单克隆抗体的特异性好，效价高，与瓜类果斑病菌不同分离物均起反应，具有较好的广谱性。应用于瓜类果斑病菌血清学诊断试剂中，特异性好，避免了交叉反应。本发明专利技术研制的瓜类果斑病菌的单克隆抗体可用于研制瓜类果斑病菌的免疫学诊断试剂，如酶联诊断试剂，胶体金免疫试纸条，抗体芯片，生物传感器等。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了一种抗瓜类果斑病菌的单克隆抗体及其应用。本专利技术所提供的抗瓜类果斑病菌的单克隆抗体是由分泌瓜类果斑病菌的单克隆抗体的杂交瘤细胞株4C6分泌产生的，该小鼠杂交瘤细胞株在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCC?No.8960。本专利技术所提供的抗瓜类果斑病菌的单克隆抗体的特异性好，效价高，与瓜类果斑病菌不同分离物均起反应，具有较好的广谱性。应用于瓜类果斑病菌血清学诊断试剂中，特异性好，避免了交叉反应。本专利技术研制的瓜类果斑病菌的单克隆抗体可用于研制瓜类果斑病菌的免疫学诊断试剂，如酶联诊断试剂，胶体金免疫试纸条，抗体芯片，生物传感器等。【专利说明】一种抗瓜类果斑病菌的单克隆抗体及其应用
本专利技术涉及一种抗瓜类果斑病菌的单克隆抗体及其应用。
技术介绍
瓜类果斑病是西瓜、甜瓜上的一种毁灭性病害，由曬酸菌属燕麦种西瓜亚种(Acidovorax citrulli )引起,是我国对内和对外的重要植物检疫性有害生物。该病主要通过种子带菌传播。苗期和成株均可发病。瓜苗染病沿中脉出现不规则褐色病变，有的扩展到叶缘，从叶背面看呈水溃状，种子带菌的瓜苗在发病后I~3周即死亡。西瓜果实染病，初在果实上部表面现数个几毫米大小灰绿色至暗绿色水溃状斑点，后迅速扩展成大型不规则的水浸状斑，变褐或龟裂，致果实腐烂，分泌出一种粘质琥珀色物质，进一步发展，细菌透过瓜皮进入果内。该病多始于成瓜向阳面，与地面接触处未见发病，瓜蔓不萎蔫，病瓜周围病叶上现褐色小斑，病斑通常在叶脉边缘，有时被一个黄色组织带包围，病斑周围呈水溃状是该病别于其他细菌病害的重要特征。对于该细菌病害，较为可行的控制措施是实行检疫控制其扩展，而这有赖于准确、快速、灵敏的检测技术的应用。酶联检测技术是一种较为快速准确的检测方法，而瓜类果斑病菌单克隆抗体的研制是酶联检测方法的基础。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种抗瓜类果斑病菌的单克隆抗体及其应用。所述抗瓜类果斑病菌的单克隆抗体是由分泌瓜类果斑病菌的单克隆抗体的杂交瘤细胞株4C6分泌产生的，该小鼠杂交瘤细胞株在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCC N0.8960。`上述分泌瓜类果斑病菌的单克隆抗体的杂交瘤细胞株4C6CGMCC N0.8960分泌产生的抗瓜类果斑病菌的单克隆抗体，也属于本专利技术的保护范围。将所述抗瓜类果斑病菌的单克隆抗体用标记酶进行标记后形成的酶标抗体，也属于本专利技术的保护范围。在本专利技术中，所述标记酶具体为碱性磷酸酯酶。本专利技术所提供的分泌瓜类果斑病菌的单克隆抗体的杂交瘤细胞株4C6CGMCCN0.8960,或所述抗瓜类果斑病菌的单克隆抗体,或所述酶标抗体在如下(al)或(a2)中的应用也属于本专利技术的保护范围:(al)检测或辅助检测瓜类果斑病菌；(a2)制备检测或辅助检测瓜类果斑病菌的试剂或试剂盒中。本专利技术的另一个目的是提供一种检测或辅助检测瓜类果斑病菌的试剂盒。本专利技术所提供的试剂盒中含有独立包装的所述抗瓜类果斑病菌的单克隆抗体或所述酶标抗体。本专利技术所提供的试剂盒中，还可含有独立包装的瓜类果斑病菌包被抗体和/或瓜类果斑病菌标准品。其中，所述瓜类果斑病菌包被抗体可为抗瓜类果斑病菌的多抗；在本专利技术中，所述瓜类果斑病菌包被抗体具体为ACD公司生产的抗瓜类果斑病菌的多抗，其产品目录号为B260-C1。本专利技术所提供的试剂盒中，还可含有独立包装的如下I) -6)试剂中的至少一种:1)包被缓冲液:溶剂为水，溶质为碳酸钠、碳酸氢钠；所述碳酸钠、所述碳酸氢钠在所述包被缓冲液中的终浓度分别为1.59g/L、2.93g/L，pH值为9.6 ;2)封闭液:含20g/L牛血清白蛋白的磷酸盐缓冲液；3)洗涤缓冲液:含有体积分数0.05%的吐温20的磷酸盐缓冲液；4)样品抽提缓冲液:溶剂为洗涤缓冲液,溶质为亚硫酸钠和聚乙烯基吡咯烷酮；所述亚硫酸钠和所述聚乙烯基吡咯烷酮在所述样品抽提缓冲液中的终浓度分别为1.3g/L和 20g/L ；5)酶标抗体稀释缓冲液:溶剂为所述洗涤缓冲液，溶质为聚乙烯基吡咯烷酮和牛血清白蛋白；所述聚乙烯基吡咯烷酮和所述牛血清白蛋白在所述酶标抗体稀释缓冲液中的终浓度分别为20g/L和2g/L ；6)底物溶液:溶剂为水，溶质为二乙醇胺；所述二乙醇胺在所述底物溶液中的终浓度分别为97mL/L，pH值为9.8。在本专利技术中，以上I) -6)试剂中的所述聚乙烯基吡咯烷酮的分子量为24000~40000。在本专利技术中，以上1)-6)试剂中的所述磷酸盐缓冲液的溶剂为水，溶质为氯化钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠和氯化钾；所述氯化钠、所述磷酸二氢钾、所述磷酸氢二钠和所述氯化钾在所述洗涤缓冲液中的终浓度分别为8.0g/L、0.2g/L、l.15g/L、0.2g/L，pH值为7.4。本专利技术的还一个目的是提供一种检测或辅助检测瓜类果斑病菌的方法。本专利技术所提供的用于检测或辅助检测瓜类果斑病菌的方法，包括使用所述试剂盒对待测样品(如植物样品)进行检测的步骤。所述试剂盒在定性或定量检测瓜类果斑病菌中的应用，也属于本专利技术的保护范围。在本专利技术中，以上所有的所述瓜类果斑病菌均可具体为瓜类果斑病菌(Acidovorax citrulli)ATCC29625。实验证明，本专利技术所提供的抗瓜类果斑病菌的单克隆抗体的特异性好，效价高，与瓜类果斑病菌不同分离物均起反应，具有较好的广谱性。应用于瓜类果斑病菌血清学诊断试剂中，特异性好，避免了交叉反应。本专利技术研制的瓜类果斑病菌的单克隆抗体可用于研制瓜类果斑病菌的免疫学诊断试剂,如酶联诊断试剂,胶体金免疫试纸条,抗体芯片，生物传感器等。保藏说明参据的生物材料(株):4C6科学描述:分泌瓜类果斑病菌的单克隆抗体的杂交瘤细胞株保藏机构:中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏机构简称:CGMCC地址:北京市朝阳区北辰西路I号院3号保藏日期:2014年3月19日保藏中心登记入册编号:CGMCC N0.8960【具体实施方式】下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。瓜类果斑病菌(Acidovoraxcitrulli):引自 ATCC,其 ATCC 编号为 29625。Balb/c小鼠:6_8周龄,雌性,购自中国军事科学院。SP2/0骨髓瘤细胞:记载于“李桂芬、马洁、魏梅生等，番茄环斑病毒单克隆抗体的制备及检测.植物检疫，2009，23 (6):16-18”一文，公众可从中国检验检疫科学研究院获得。弗氏完全佐剂=Sigma公司，产品目录编号为F5881。弗氏不完全佐剂=Sigma公司，产品目录编号为F5506。下述实施例中ELISA检测中所用到的各溶液配方具体如下:包被缓冲液:将碳酸钠1.59g，碳酸氢钠2.93g溶于水，用水定容至1L;PH值为9.6。封闭液:含20g/L牛血清白蛋白(BSA)的磷酸盐缓冲液。其中，磷酸盐缓冲液的配方为:将氯化钠8.0g，磷酸二氢钾0.2g，磷酸氢二钠1.15g，氯化钾0.2g，溶于水中，用水定容至1L;PH值为7.4。洗涤缓冲液:含有体积分数0.05%的吐温20的磷酸盐缓冲液。其中,磷酸盐缓冲液的配方为:将氯化钠8.0g，磷酸二本文档来自技高网...

【技术保护点】
分泌瓜类果斑病菌的单克隆抗体的杂交瘤细胞株4C6，在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCC No.8960。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李桂芬，马洁，田茜，魏梅生，赵文军，
申请(专利权)人：中国检验检疫科学研究院，
类型：发明
国别省市：北京;11