本发明专利技术涉及嵌合人乳头瘤病毒(HPV)病毒样颗粒(VLP)，其具有约30nm的直径。本发明专利技术进一步涉及通过向受试者施用本发明专利技术的嵌合HPVVLP治疗和/或预防HPV感染和/或宫颈癌的方法。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利摘要】本专利技术涉及嵌合人乳头瘤病毒(HPV)病毒样颗粒(VLP)，其具有约30nm的直径。本专利技术进一步涉及通过向受试者施用本专利技术的嵌合HPVVLP治疗和/或预防HPV感染和/或宫颈癌的方法。【专利说明】HPV嵌合颗粒专利技术背景本专利技术涉及具有约30nm的直径的嵌合人乳头瘤病毒(HPV)病毒样颗粒(VLP)和通过施用本专利技术的嵌合HPV VLP治疗和/或预防HPV感染和/或宫颈癌的方法。宫颈癌主要由HPV感染引起并且是世界范围内女性中第三大最常见的癌症(Ferlay等人，2010)。因此，HPV疫苗的开发对于预防性的癌症研究是优先的。LI主要衣壳蛋白是用于预防性疫苗的选择的抗原，因为它是免疫显性的并自组装在与真实病毒颗粒结构和免疫学相似的VLP中。用VLP接种在动物和人中都诱发高滴定度的中和抗体(NAb)，并且两种多价的基于HPV LlVLP的预防性疫苗已得到许可并且在预防疫苗类型HPV-16和18感染和相关疾病中高度有效(Schiller等人，2008)。尽管现在基于LlVLP的HPV疫苗是高效的，但疫苗的类型特异性(BiOwn等人，2009 ;Wheeler 等人，2009)，缺乏治疗有效性(FUTURE IIStudy Group, 2007 ；Hildersheim等人，2007)和高成本(Schiller等人，2008)已限制了其广泛应用，尤其在发展中国家，其具有宫颈癌负担的>80% (Parkin和Bray，2006)。因此，有紧迫的对买得起的第二代HPV疫苗的需求，所述第二代HPV疫苗扩大保护到包含多种致癌的HPV类型，并改善治疗功效以清除已建立的HPV感染和癌性病变。广谱的预防性HPV疫苗可以通过交叉中和L2表位进行开发。所述L2表位可以整合入LI的表面区域以产生L1/L2嵌合体，所述嵌合体在组装的LI表面展示L2肽(W003/097673 ；Kawana 等人，1999，2003 ；Slupetzky 等人，2007 ；Kondo 等人，2007，2008)。使用植物表达系统大规模生产外源蛋白已被提议为是用于疫苗生产的划算的备选方案(Fischer等人，2004)，其具有确定的用于高水平蛋白表达和优化的瞬时表达的趋势(Rybicki，2009)。几 个研究组已在植物中表达出了 HPV-16L1 (Biemelt等人，2003 ;W02006/119516 ；Maclean 等人，2007)。植物系统的一个实际的局限性是重组蛋白的低产量，可能是由于蛋白不稳定或表达水平低(Fischer等人,2004 ;0bembe等人,2011)。据估计,植物表达重组蛋白的产量需要大于总可溶蛋白(TSP)的1%才是经济上可行的(Fischer等人，2004)。这对于使用核转化的转基因植物的重组蛋白的表达是尤其有问题的，因为这些系统经常与重组蛋白的低产量相关(Rybicki，2009)。HPV-16LI已经转基因表达在核转化的马铃薯和烟草植物中，但始终报告HPV-16LI的低表达水平(< 1% TSP)并且诱发的免疫应答相对弱(Biemelt等人，2003 ；Varsani 等人，2003b ；Varsani 等人，2006a)。然而，LI基因的人密码子优化并靶向叶绿体在转基因的和农杆菌(Agrobacterium)介导的瞬时烟草表达系统已显著改善了 HPV-16L1的表达至多达TSP的17% (Maclean 等人，2007)。一项最近源自植物的HPV疫苗的开发是在植物中首次表达HPV-16L1嵌合体。LI/E6/E7嵌合体由HPV-16L1通过C 端融合于几个E6和E7表位组成并且在转基因番茄中表达(Paz De la Rosa等人，2009)。然而，产量低(TSP的0.05_0.1 % )，并且因此无法在商业上使用。W0201I/077371描述了一种生产嵌合HPVLl多肽的方法，其具有相对于在昆虫、植物、或酵母表达系统中HPV LI蛋白增加的表达水平。尽管在植物中生产的从HPV LI和BPVL2(氨基酸1-88)的人密码子优化的L1/L2嵌合体形成约55nm的VLP，其它的HPV L1/L2嵌合体只能形成约17nm直径的壳粒。 尽管壳粒在室温稳定，但它们相比VLP只能诱导20到40倍较低的体液免疫应答( Thones等人，2008)。因此开发一种在表达系统中具有商业可用水平的表达的包含LI和L2的嵌合VLP将是有益的。这种嵌合VLP将更易于纯化并且可能比嵌合壳粒更具有免疫原性。专利技术概述根据本专利技术的第一个方面，提供一种包含约30nm的直径的嵌合人乳头瘤病毒(HPV)病毒样颗粒(VLP)，所述嵌合HPV VLP具有人密码子优化的核苷酸序列编码的嵌合HPV16L1/L2多肽，所述嵌合HPV16L1/L2多肽进一步包含含有约13个氨基酸到约26个氨基酸的HPV L2肽的HPV LI多肽，所述HPV L2肽从HPV16L1多肽的残基414插入，其中，插入的HPV L2肽的氨基酸替代HPV16L1多肽中相应的氨基酸。例如，插入的HPV L2肽可以是如SEQ ID NO:7所示的人密码子优化的核苷酸序列编码的13个氨基酸LVEETSFIDAGAP的肽(SEQ ID NO:3)，或如SEQ ID NO:9所示的人密码子优化的核苷酸序列编码的20个氨基酸QLYKTCKQAGTCProilPKV的肽(SEQID NO:5)，或如SEQ ID NO:8所示的人密码子优化的核苷酸序列编码的26个氨基酸GGLGIGTGSGTGGRTGYIPLGTRPPT 的肽(SEQ ID NO:4)。优选的，所述插入的HPV L2肽是如SEQ ID NO:7所示的人密码子优化的核苷酸序列编码的13个氨基酸LVEETSF IDAGAP的肽(SEQ ID NO:3)。HPV类型16的LI蛋白可以进一步由修饰核苷酸序列编码以致核定位信号缺失。优选的，所述HPV-16L1/L2 多肽包含如 SEQ ID NO: 22, SEQ IDN0:23 或 SEQ ID NO:24所示的氨基酸序列，或其变体或衍生物。优选的，所述HPV-16L1多肽如SEQ ID NO:1所示，并且所述HPV-16L1多肽如SEQID NO:2所示的人密码子优化的HPV-16L1多核苷酸序列编码。直径约30nm的嵌合HPV VLP可以是一种植物表达的嵌合HPV VLP，所述嵌合HPVVLP从植物表达系统中纯化。优选的，所述表达的嵌合VLP可以靶向植物的叶绿体。根据本专利技术一个进一步的方面，提供一种药物组合物，所述药物组合物包含如本专利技术的直径为30nm的嵌合HPV VLP和药学上可接受的载体。所述组合物还可以包含佐剂。根据本专利技术一个进一步的方面，提供一种生产具有尺寸为直径约30nm的嵌合HPVVLP，所述方法包含以下步骤:(i)提供编码嵌合HPV16L1/L2多肽的嵌合人密码子优化的核苷酸序列，所述嵌合HPV16L1/L2多肽包含具有约13个氨基酸到约26个氨基酸的HPV L2肽的HPV16L1多肽，所述HPV L2肽从嵌合HPV16L1/L2多肽的残基414插入，其中所述插入的HPV L2肽的氨基酸代替HPV16L1多肽的相应氨基酸； (ii)将嵌本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种嵌合人乳头瘤病毒(HPV)病毒样颗粒(VLP)，其具有约30nm的直径，所述嵌合HPV VLP包含由人密码子优化的核苷酸序列编码的嵌合HPV16L1/L2多肽，所述嵌合HPV16L1/L2多肽进一步包含含有约13个氨基酸到约26个氨基酸的HPV L2肽的HPV16L1多肽，所述HPV L2肽从所述HPV16L1多肽的残基414插入，并且其中插入的HPV L2肽的氨基酸替代HPV16L1多肽中相应的氨基酸。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：爱德华·彼得·雷比茨基，因加·伊莎贝尔·希策罗特，
申请(专利权)人：开普敦大学，
类型：发明
国别省市：南非;ZA
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