微RNA-34a的小分子调节剂制造技术

本发明专利技术提供了鉴定作为miR-34a调节剂的化合物的方法。本发明专利技术还提供了miR-34a调节剂和含有该调节剂的组合物。本发明专利技术还提供了通过给予miR-34a调节剂来治疗疾病的方法。

【技术实现步骤摘要】
微RNA-34a的小分子调节剂相关申请的交叉引用本申请要求于2012年12月21日递交的美国临时申请第61/745,348号的优先权，为所有目的其内容通过引用全部并入本文。专利技术背景微RNA通过调控基因表达在多种生物过程中起着关键作用。微RNA由真核生物核DNA编码，其被认为是通过与mRNA分子中的互补序列进行碱基配对来起作用。微RNA能提供对基因活性和表达的负调控(转录本降解和扣留(sequestering)、翻译抑制)和正调控(转录激活和翻译激活)。微RNA在真核生物中具有良好的保守性，并被认为是基因调控的重要的且进化上古老的成分。人类基因组可编码1000多种微RNA，其可靶向约60%的哺乳动物基因，且在很多人类细胞类型中很丰富。哺乳动物的微RNA通常仅表现出对其mRNA靶标的部分互补性。该部分互补性能够使得由较少数目的微RNA来组合调控大量基因。的确，组合调控是微RNA调控的一般特征；且给定的微RNA可具有多种不同的mRNA靶标，而给定的靶标可类似地被多种微RNA所靶向。已充分证实在多种癌症中存在微RNA的异常表达。例如，微RNA可发挥作用以促进致癌基因或肿瘤抑制基因的效果。因而，微RNA代表了有前景的用于癌症治疗的治疗靶标，存在提供能够调节微RNA水平和/或活性以用于治疗目的的分子的需求。本专利技术满足了该需求和其他相关需求。专利技术概述本专利技术提供了抑制细胞增殖的方法，包括将细胞与有效量的以下化合物接触：其中R1、R2、R3、R4、R5、R6独立地选自H、CH3、CH2CH3、F、Cl、Br、NO2、OH、COOH、NH2、CF3和CN。在另一方面，R1-R5各自为CH3，且R6为H。在另一方面，所述细胞为癌细胞。在另一方面，所述癌细胞包括肝癌细胞。在另一方面，所述细胞为内皮细胞。在另一方面，所述细胞增殖包括血管生成。在另一方面，所述细胞存在于患者体内。在另一方面，接触步骤包括经皮下、肌肉内、静脉内、腹膜内或经口给予前述化合物。在一些情况下，所述给予是针对有需要的受试者，如表现出由细胞增殖引起的疾病的受试者。在一些情况下，所述由细胞增殖引起的疾病为癌症。在一些情况下，所述癌症为诸如肝癌的癌。在一些情况下，所述方法还包括同时或顺次给予化学治疗剂、抗炎药物、免疫调节剂、抗呕化合物或抗贫血药物如诱导红细胞产生的药物。例如，抗贫血药物可为红细胞生成素。在另一方面，所述方法还包括调节miRNA-34a。在另一方面，所述方法还包括激活miRNA-34a。在另一方面，所述方法还包括下调细胞周期蛋白D1。在另一方面，相比没有被接触的细胞，所述miRNA-34a的活性或表达增加了至少3倍或者降低至至少1/3。在另一方面，使用编码报告基因的多核苷酸检测调节miRNA-34a的步骤。在另一方面，所述编码报告基因的多核苷酸包含编码荧光素酶或荧光蛋白的序列。在一个实施方案中，本专利技术提供了一种方法，其包括如下步骤：(a)将细胞与候选化合物接触，所述细胞含有表达盒，所述表达盒包含：(i)编码报告基因的多核苷酸序列，其可操作地连接至在细胞内具有活性或可诱导的5’启动子；和(ii)编码miRNA-34a结合位点的多核苷酸序列，其可操作地连接至所述报告基因的3’端；(b)当所述细胞至于允许所述报告基因表达的条件下时，检测所述报告基因的表达水平；和(c)当相比缺少所述化合物的情况下的报告基因的表达水平，报告基因的表达水平降低时，鉴定所述化合物作为miRNA-34a激活剂，而当相比缺少所述化合物的情况下的报告基因的表达水平，报告基因的表达水平增加时，鉴定所述化合物作为miRNA-34a抑制剂。在另一方面，所述报告基因为荧光素酶或荧光蛋白。在另一方面，所述细胞为癌细胞。在另一方面，所述miRNA-34a结合位点包含CTGGCAGTGTCTTAGCTGGTTGTA。在一个实施方案中，本专利技术提供了一种表达盒，其包含：(a)编码报告基因的多核苷酸序列，其可操作地连接至在细胞内具有活性或可诱导的5’启动子；和(b)编码miRNA-34a结合位点的多核苷酸序列，其可操作地连接至所述报告基因的3’端。在另一方面，所述细胞为癌细胞。在另一方面，所述报告基因为荧光素酶或荧光蛋白。在另一方面，所述组合物还包含测试细胞。在另一方面，所述测试细胞为癌细胞。在另一方面，所述癌细胞为肝癌细胞。在另一个实施方案中，本专利技术提供了一种组合物，其包含以下化合物和药学可接受的赋形剂：其中R1、R2、R3、R4、R5、R6独立地选自H、CH3、CH2CH3、F、Cl、Br、NO2、OH、COOH、NH2、CF3和CN。在一个方面中，所述组合物还包含抗贫血药物或促进红细胞产生的药剂。例如，所述组合物可包含红细胞生成素。在一些情况下，所述组合物可包含抗炎剂如泼尼松(prednisone)或地塞米松。在一些情况下，所述组合物可包含化学治疗剂。在一些情况下，所述组合物可包含免疫调节剂。在另一个实施方案中，本专利技术提供了用于抑制细胞增殖的试剂盒，所述试剂盒包含组合物，所述组合物包含以下化合物和药学可接受的赋形剂：其中R1、R2、R3、R4、R5、R6独立地选自H、CH3、CH2CH3、F、Cl、Br、NO2、OH、COOH、NH2、CF3和CN。在另一方面，所述组合物被配制用于经皮下、肌肉内、静脉内、腹膜内、局部或经口给予。所述试剂盒可进一步包含用于检测细胞增殖的检测试剂。例如，所述用于检测细胞增殖的检测试剂可选自：CyQuant、CyQuantNF、CyQuantGR、羧基荧光素琥珀酰亚胺酯、VPD450、溴脱氧尿苷、3H-胸苷、5-乙炔基-2’-脱氧尿苷、2,3,-双(2-甲氧基-4-硝基-5-磺苯基)-5-[(苯基氨基)-羰基]-2H-四唑钠盐、3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基溴化四唑、[3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-磺苯基)-2H-四唑盐和吩嗪硫酸乙酯。在一些情况下，所述试剂盒可包含抗贫血药物或促进红细胞产生的药剂如红细胞生成素。在一些情况下，所述试剂盒可包含抗炎剂如泼尼松或地塞米松。在一些情况下，所述试剂盒可包含化学治疗剂。在一些情况下，所述试剂盒可包含免疫调节剂。在一些情况下，所述试剂盒可包含抗呕化合物。据此，本申请还涉及以下方面或保护的主题。主题1.有效量的以下化合物在制备用于抑制细胞增殖的药物中的用途，其中R1、R2、R3、R4、R5、R6独立地选自H、CH3、CH2CH3、F、Cl、Br、NO2、OH、COOH、NH2、CF3和CN。主题2.根据主题1所述的用途，其中R1-R5各自为CH3，且R6为H。主题3.根据主题1所述的用途，其中所述细胞为癌细胞。主题4.根据主题3所述的用途，其中所述癌细胞为肝癌细胞。主题5.根据主题1所述的用途，其中所述细胞为内皮细胞。主题6.根据主题5所述的用途，其中所述细胞增殖包括血管生成。主题7.根据主题1所述的用途，其中所述细胞存在于患者体内。主题8.根据主题1所述的用途，其中所述药物用于调节miRNA-34a。主题9.根据主题1所述的用途，其中所述药物还包含抗贫血化合物、抗呕化合物、抗炎剂、免疫调节剂或化学治疗剂。主题10.根据主题8所述的用途，其中所述药物能激活本文档来自技高网...

【技术保护点】
抑制细胞增殖的方法，包括将细胞与有效量的以下化合物接触：其中R1、R2、R3、R4、R5、R6独立地选自H、CH3、CH2CH3、F、Cl、Br、NO2、OH、COOH、NH2、CF3和CN。

【技术特征摘要】
2012.12.21 US 61/745,348;2013.12.17 US 14/109,3011.非治疗目的的抑制细胞增殖的方法，包括将体外培养的肝癌或内皮细胞与有效量的以下化合物接触：其中R1-R5各自为CH3，且R6为H。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述体外培养的细胞为肝癌细胞。3.根据权利要求1所述的方法，其中所述体外培养的细胞为内皮细胞。4.根据权利要求3所述的方法，其中所述细胞增殖包括血管生成。5.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法还包括调节miRNA-34a。6.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法还包括将体外培养的肝癌或内皮细胞与抗炎剂、免疫调节剂或化学治疗剂接触。7.根据权利要求5所述的方法，其中所述方法还包括激活miRNA-34a。8.根据权利要求5所述的方法，其中所述方法还包括下调细胞周期蛋白D1。9.根据权利要求5所述的方法，其中相比没有被接触的细胞，所述miRNA-34a的活性或表达增加了至少3倍或者降低至至少1/3。10.根据权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈扬超，
申请(专利权)人：香港中文大学，
类型：发明
国别省市：中国香港;81