本发明专利技术公开手性分离药物制剂中精氨酸的电泳中介微分析测定方法。该方法包括如下步骤：（1）将衍生化试剂的溶液进样至毛细管柱中，然后将药物样品溶液进样，再将衍生化试剂的溶液进样，之后将毛细管柱两端插入操作缓冲液中于电压10kV下维持3s～10s进行衍生化反应；（2）在线进行非手性毛细管胶束电动色谱分离测定；（3）将得到药物样品测定的电泳图，对照对照品D,L-精氨酸电泳图，确定药物样品是否含有D-精氨酸和/或L-精氨酸。该方法简便、快速、准确且更经济，具有样品和衍生化试剂的用量极少，易于控制和自动化，专属性强等特点。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开。该方法包括如下步骤：（1）将衍生化试剂的溶液进样至毛细管柱中，然后将药物样品溶液进样，再将衍生化试剂的溶液进样，之后将毛细管柱两端插入操作缓冲液中于电压10kV下维持3s～10s进行衍生化反应；（2）在线进行非手性毛细管胶束电动色谱分离测定；（3）将得到药物样品测定的电泳图，对照对照品D,L-精氨酸电泳图，确定药物样品是否含有D-精氨酸和/或L-精氨酸。该方法简便、快速、准确且更经济，具有样品和衍生化试剂的用量极少，易于控制和自动化，专属性强等特点。【专利说明】
本专利技术属于分析化学领域，具体涉及一种。
技术介绍
药物制剂中的氨基酸常用于药物的助溶、调节制剂的pH值、增加制剂的稳定性或减轻给药时的疼痛感。已知氨基酸在生命活动中扮演着重要的角色，但某些氨基酸的D-构型具有与其L-构型不同的生理活性，因此，对手性氨基酸的分离分析历来是生命科学、食品科学、环境科学等及相关领域的重要研究内容。大多数氨基酸无光吸收特征，一般需采用质谱等特殊的检测器或进行衍生化反应后才能被检测。邻苯二甲醛是目前氨基酸分析中使用最广泛的衍生化试剂。在碱性条件下，邻苯二甲醛、巯基试剂与含伯胺基团的化合物迅速反应，生成可进行紫外或荧光检测的异吲哚衍生物。但该衍生物不稳定，易受反应时间、温度以及光线等的影响，须严格控制反应条件，故此法多用于全自动的在线分离分析。邻苯二甲醛衍生物可在330?350nm处进行紫外检测，而过量的衍生化试剂、抗生素及其杂质一般在此波长范围内无吸收，故不干扰对邻苯二甲醛衍生物的检测。电泳中介微分析是两种或两种以上的物质在毛细管内进行反应，然后在电场作用下分离产物、副产物及未完全反应物等的过程。现有技术中，应用电泳中介微分析技术手性分离氨基酸的文献较少，仅有的研究氨基酸手性分离的方法均存在若干缺陷。如Tivesten等人采用邻苯二甲醛和手性巯基试剂1-硫代-β -D-葡萄糖四乙酸酯进行手性分离，但该方法存在区带展宽效应的缺陷(Journal of High Resolution Choromatography, 1996,19:229-233),且在该分离系统中L-精氨酸衍生物与在其之前迁移的一衍生化副产物分离较差(Journal of Choromatography A, 1995, 708:323-337) ;Han 等和 Fradi 等人均选用氯甲酸_9_荷基甲酯(9-f luoroenylmethyl chloroformate)为衍生化试剂以及手性拆分剂，但仅能部分分离精氨酸，且检测波长分别为214nm和210nm，抗生素及其杂质干扰检测(Electrophoresis, 2007, 28:2765-2770 ；Journal ofChoromatographyA,2012,1267:121-126) ;Martinez-Giron等人采用6-氨基喹啉-N-(羟基琥珀酰亚胺基)氨基甲酸酯(6-aminoquinoIy 1-N-hydroxysuccinimidyI carbamate)为衍生化试剂以及价格昂贵的手性拆分剂，但检测波长为260nm,抗生素及其杂质干扰检测(Electrophoresis, 2009, 30:696-704)。目前尚未见文献报道，采用电泳中介微分析技术手性分离药物制剂中氨基酸且能克服上述缺陷的方法，该现状亟待解决。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是克服了现有技术的电泳中介微分析技术手性分离氨基酸方法存在区带展宽效应、与其他衍生化副产物分离较差，或者仅能部分分离精氨酸、抗生素及其杂质干扰检测、或者价格昂贵等缺陷，提供了一种简便、快速、准确且更经济，具有样品和衍生化试剂的用量极少，易于控制和自动化，专属性强的手性分离药物制剂中精氨酸的电泳中介微分析方法。本专利技术的包括如下步骤:(I)将衍生化试剂的溶液进样至毛细管柱中，然后将药物样品溶液进样，再将衍生化试剂的溶液进样，之后将毛细管柱两端插入操作缓冲液中于电压IOkV下维持3s?IOs进行衍生化反应；其中，所述的毛细管柱为未涂层弹性石英毛细管；所述的毛细管柱的温度为15°C?25°C;所述的衍生化试剂为邻苯二甲醛和N-酰基-巯基氨基酸类化合物；所述的药物样品溶液中精氨酸与衍生化试剂的摩尔比为(I:3)~(1:10);反应体系的pH值为9.5?10.5 ;所述的操作缓冲液为pH值9.0?9.4的含十二烷基硫酸钠的硼酸盐缓冲液；所述的十二烧基硫酸钠的浓度为60?75mmol/L ;所述的硼酸盐缓冲液的浓度为8?15mmol/L ；(2)在步骤(I)的衍生化反应后，在线进行非手性毛细管胶束电动色谱分离测定；所述的非手性毛细管胶束电动色谱分离测定的检测波长为330?350nm ；(3)将步骤(2)测定得到药物样品测定的电泳图，对照按照前述步骤(I)和(2)将对照品D，L-精氨酸测定的电泳图，确定药物样品是否含有D-精氨酸和/或L-精氨酸。本专利技术中，所述的药物样品为本领域常规所说的含有精氨酸药物，不受其中的药物活性物质影响，如注射用氨曲南、注射用盐酸头孢吡肟、注射用头孢拉定、注射用头孢他啶等等均可。本专利技术中，所述的药物样品溶液为本领域常规所说的含有精氨酸药物的水溶液，一般含有精氨酸药物加水溶解并稀释后，滤过即得，较佳的为含精氨酸浓度lmg/ml的水溶液。本专利技术中，所述的衍生化试剂的溶液中邻苯二甲醛的浓度较佳的为2mg/ml?6mg/ml。本专利技术中，所述的邻苯二甲醛和N-酰基-巯基氨基酸类化合物的摩尔比较佳的为1:1。本专利技术中，所述的衍生化试剂的溶液为按照本领域常规配置，较佳的先将衍生化试剂加乙醇至溶解，10mmol/L硼砂溶液至目标浓度,用lmol/L氢氧化钠溶液调节pH值至9.5?10.5，较佳的为10.0。所述的衍生化试剂的溶液优选pH值为衍生化反应体系优选pH值。本专利技术中，所述的药物样品溶液中精氨酸与衍生化试剂的摩尔比较佳的为(I:4)?(1:8)。本专利技术中，所述的N-酰基-巯基氨基酸类化合物为本领域常规所说，较佳的为N-乙酰基-L-半胱氨酸、N-乙酰基-D-半胱氨酸、N-乙酰基-L-半胱氨酸甲酯、N-乙酰基-D-半胱氨酸甲酯、N-(叔丁氧基羰基)-L-半胱氨酸甲酯、N-异丁酰基-L-半胱氨酸、N-异丁酰基-D-半胱氨酸、L-青霉胺、D-青霉胺、或者N-乙酰基-D-青霉胺。本专利技术中，所述的操作缓冲液中，硼酸盐缓冲液的pH值较佳的为9.2 ;硼酸盐缓冲液的浓度较佳的为10mmol/L ;十二烧基硫酸钠的浓度较佳的为65mmol/L。本专利技术的手性分离药物制剂中精氨酸的电泳中介微分析方法使用的设备为本领域常规使用的毛细管电泳仪，市售可得，如Agilent G1600AX型毛细管电泳仪。本专利技术中，所述的进样一般按本领域常规操作在进样端，即阳极进样。本专利技术步骤(I)中，所述的反应体系的pH值较佳的为10.0。本专利技术中，所述的进样的条件为常规毛细管操作进样条件，较佳的，所述的衍生化试剂的溶液在20mbar压力下进样2s?3s至毛细管柱中，然后将药物样品溶液在20mbar压力下进样2s?3.5s,再将衍生化试剂的溶液在20mbar压力下进样2s?3s。本专利技术中，所述的衍生化反应的操作较佳的为毛细管柱两端本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种手性分离药物制剂中精氨酸的电泳中介微分析测定方法，其特征在于，其包括如下步骤：（1）将衍生化试剂的溶液进样至毛细管柱中，然后将药物样品溶液进样，再将衍生化试剂的溶液进样，之后将毛细管柱两端插入操作缓冲液中于电压10kV下维持3s～10s进行衍生化反应；其中，所述的毛细管柱为未涂层弹性石英毛细管；所述的毛细管柱的温度为15℃～25℃；所述的衍生化试剂为邻苯二甲醛和N‑酰基‑巯基氨基酸类化合物；所述的药物样品溶液中精氨酸与衍生化试剂的摩尔比为（1：3）～（1：10）；反应体系的pH值为9.5～10.5；所述的操作缓冲液为pH值9.0～9.4的含十二烷基硫酸钠的硼酸盐缓冲液；所述的十二烷基硫酸钠的浓度为60～75mmol/L；所述的硼酸盐缓冲液的浓度为8～15mmol/L；（2）在步骤（1）的衍生化反应后，在线进行非手性毛细管胶束电动色谱分离测定；所述的非手性毛细管胶束电动色谱分离测定的检测波长为330～350nm；（3）将步骤（2）测定得到药物样品测定的电泳图，对照按照前述步骤（1）和（2）将对照品D,L‑精氨酸测定的电泳图，确定药物样品是否含有D‑精氨酸和/或L‑精氨酸。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：刘浩，徐伟东，潘颖，杨美成，
申请(专利权)人：上海市食品药品检验所，上海新亚药业有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31
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