一种利用病毒载体诱导番茄抗TYLCV的方法技术

本发明专利技术为一种利用病毒载体诱导番茄抗TYLCV的方法，其特征在于：利用病毒载体在番茄体内表达病毒序列而诱导番茄对病毒产生抗性，根据已经报道的TYLCV基因组序列，利用生物信息学软件(DNAStar，Madison，WI，USA)分析寻找其保守区段(ΔRep)，设计引物，以TYLCV侵染的番茄叶片总DNA为模板，扩增克隆目的保守片段(约350nts)。将该片段反向重复插入TYLCV随机序列两侧(约200nts)。再用限制性酶BamHI和EcoRI介导克隆至沉默载体TRV2中，构建基于RNA干扰的表达hpRNA的植物沉默载体TRV2-ΔRep，利用电击法导入农杆菌EHA105，浸润番茄幼苗上部刚刚完全展开的叶片，从而使番茄获得对TYLCV的抗性。采用本发明专利技术的方法，可以快速使番茄获得对TYLCV的抗性，大大节约了传统育种的成本。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术为一种利用病毒载体诱导番茄抗TYLCV的方法，其特征在于：利用病毒载体在番茄体内表达病毒序列而诱导番茄对病毒产生抗性，根据已经报道的TYLCV基因组序列，利用生物信息学软件(DNAStar，Madison，WI，USA)分析寻找其保守区段(ΔRep)，设计引物，以TYLCV侵染的番茄叶片总DNA为模板，扩增克隆目的保守片段(约350nts)。将该片段反向重复插入TYLCV随机序列两侧(约200nts)。再用限制性酶BamHI和EcoRI介导克隆至沉默载体TRV2中，构建基于RNA干扰的表达hpRNA的植物沉默载体TRV2-ΔRep，利用电击法导入农杆菌EHA105，浸润番茄幼苗上部刚刚完全展开的叶片，从而使番茄获得对TYLCV的抗性。采用本专利技术的方法，可以快速使番茄获得对TYLCV的抗性，大大节约了传统育种的成本。【专利说明】一种利用病毒载体诱导番茄抗TYLCV的方法一、
:本专利技术涉及简便诱导番茄对TYLCV产生抗性的方法，具体是一种利用番茄自身抗病毒的规律，通过在番爺植株体内表达病毒序列从而使番爺植株产生对病毒的抗性。二、
技术介绍
:番爺黄化曲叶病毒(Tomato yellow lea fcurl virus,TYLCV)是世界范围内广泛存在的一种植物单链DNA病毒，该病毒对番茄生产造成了严重的危害。自2006年该病害首次在我国上海地区发现以来，该病害已经蔓延到了浙江、江苏、山东、河北等地，对我国的番茄生产构成了很大的威胁。RNA干扰(也称RNA沉默)是近年发现的植物对病毒的自然抗性机制，利用该机制进行番茄抗TYLCV的研究有望获得广谱高抗的番茄材料，同时可为进一步揭示RNA介导的抗病机理研究提供理论依据，因而具有重要的理论意义和应用前景。三、
技术实现思路
:本专利技术提出一种通过利用病毒载体在番茄植株体内表达TYLCV序列从而诱导番茄对TYLCV产生抗性的方法。本专利技术是这样实现的:利用病毒载体在番茄体内表达病毒序列而诱导番茄对病毒产生抗性，根据已经报道的TYLCV基因组序列，利用生物信息学软件(DNAStar，Madison,WI,USA)分析寻找其保守区段(Λ Rep)，设计引物，以TYLCV侵染的番茄叶片总DNA为模板，扩增克隆目的保守片段(约350nts)。将该片段反向重复插入TYLCV随机序列两侧(约200nts)。再用限制性酶BamHI和EcoRI介导克隆至沉默载体TRV2中，构建基于RNA干扰的表达hpRNA的植物沉默载体·TRV2- Δ Rep,利用电击法导入农杆菌EHA105，浸润番茄幼苗上部刚刚完全展开的叶片，从而使番茄获得对TYLCV的抗性。采用本专利技术的方法，可以快速使番茄获得对TYLCV的抗性，大大节约了传统育种的成本。本专利技术的有益效果是:这种方法可以快速使番茄获得对TYLCV产生抗性，省去传统育种多代杂交选育的过程，节省了劳动力，降低成本。四、【具体实施方式】:1.病毒序列的选择与克隆根据已经报道的TYLCV基因组序列，利用生物信息学软件(DNAStar，Madison，WI，USA)分析寻找其保守区段(Λ Rep)，设计引物，以TYLCV侵染的番茄叶片总DNA为模板，扩增克隆目的保守片段(约350nts)。2.病毒表达载体构建将该片段反向重复插入双生病毒随机序列两侧(约200nts)。再用限制性酶BamHI和EcoRI介导克隆至沉默载体TRV2中，构建基于RNA干扰的表达hpRNA的植物沉默载体TRV2- Δ R印，利用电击法导入农杆菌EHA105。3病毒载体的接种将农杆菌在平板培养基上划线培养，挑取单菌落用液体培养基振荡培养至OD值0.6~1.0，利用注射器注射浸润番茄幼苗上部刚刚完全展开的叶片，番茄苗岭控制在3~4片 真叶期。【权利要求】1.一种利用病毒载体诱导番爺抗TYLCV的方法,其特征在于:利用病毒载体表达病毒序列从而诱导番茄对TYLCV产生抗性。2.根据权利要求1所述的利用病毒载体诱导番茄抗TYLCV的方法，其特征在于:所使用的病毒载体为TRV2，所表达的序列为TYLCV序列。3.根据权利要求1或2所述的利用病毒载体诱导番茄抗TYLCV的方法，其特征在于:构建的载体利用电击法导入农杆菌，再通过农杆菌浸润番茄叶片将病毒载体导入番茄植株内表达。·【文档编号】C12N15/113GK103849649SQ201210508803【公开日】2014年6月11日 申请日期:2012年12月3日 优先权日:2012年12月3日 【专利技术者】张辉, 朱为民, 朱龙英, 万延慧, 刘娜, 田守波 申请人:上海市农业科学院, 上海科园种子有限公司本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种利用病毒载体诱导番茄抗TYLCV的方法，其特征在于：利用病毒载体表达病毒序列从而诱导番茄对TYLCV产生抗性。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张辉，朱为民，朱龙英，万延慧，刘娜，田守波，
申请(专利权)人：上海市农业科学院，上海科园种子有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31