蛋白质纯化方法技术

本发明专利技术提供一种吸附蛋白质的纯化方法，该方法使用了蛋白质吸附多孔膜，方法中提供一种可抑制蛋白质的吸附能力降低的被吸附蛋白质的溶出方法。该方法包含吸附工序和溶出工序，在溶出工序中，使至少1种溶出液沿着与原液的通过方向相反的方向进行通过，所述原液是吸附工序中的含有吸附对象蛋白质的原液。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利摘要】本专利技术提供一种吸附蛋白质的纯化方法，该方法使用了蛋白质吸附多孔膜，方法中提供一种可抑制蛋白质的吸附能力降低的被吸附蛋白质的溶出方法。该方法包含吸附工序和溶出工序，在溶出工序中，使至少1种溶出液沿着与原液的通过方向相反的方向进行通过，所述原液是吸附工序中的含有吸附对象蛋白质的原液。【专利说明】
本专利技术涉及一种用具有蛋白质吸附能力的高分子包覆基体材料表面而成的多孔膜进行的。
技术介绍
近年来，在生物技术产业中，期望确立一种可有效地大量生产及大量纯化蛋白质的技术。 一般而言，由于蛋白质通过使用源自动物的细胞株或大肠杆菌等菌体的培养来生产，因此，需要将作为目标的蛋白质(以下，有时记为“目标蛋白质”。)从培养液中分离且纯化。特别是为了将利用了抗体的医药品(抗体医药品)实用化，需要从细胞培养液中将细胞碎片等浑浊成分、及源自细胞的溶存的蛋白质等非浑浊成分除去，将其纯化至对人类的治疗用途而言充分的纯度。在该纯化工序中，使用蛋白质吸附多孔膜或空心颗粒(粒子状的吸附材料)等蛋白质吸附材料。 作为这样的蛋白质吸附材料，可以举出如专利文献I~5及非专利文献I中所记载那样的蛋白质吸附多孔膜。 最近，对抗体医药品的需要迅速增加，意向大量生产作为抗体医药品的蛋白质。而且，伴随培养技术的迅速进步，提高纯化工序的能力也成为了课题，特别是对提高可实现高流速处理的蛋白质吸附多孔膜的能力寄予期待。 现有技术文献 专利文献 专利文献1:国际公开第2009/054226号 专利文献2:日本特开2009-53191号公报 专利文献3:日本特表2006-519273号公报 专利文献4:美国专利第6780327号说明书 专利文献5:美国专利第5547575号说明书 非专利文献 非专利文献 l:Kyoichi Saito, CHARGED POLYPER BRUSH GRAFTED ONTOPOROUS HOLLOff-FIBER MEMBRANE IMPROVES SEPARATION AND REACTION INB10TECN0L0GY，Separation Science and Technology,ENGLAND,Taylar&Francis, 2002，37(3)，535-554
技术实现思路
专利技术所要解决的技术问题 一般而言，使含有作为吸 附对象的蛋白质的原液(以下，有时记为“原液”)通过蛋白质吸附多孔膜通过，使蛋白质吸附后，再使吸附的蛋白质(以下，有时记为“被吸附蛋白质”)溶出，当实现纯化的目的之后，则将蛋白质吸附多孔膜废弃。但是，为了提高纯化工序的能力，要求重复使用蛋白质吸附多孔膜。 通过现有技术的处理使蛋白质吸附多孔膜再生而重复使用时，则存在吸附能力逐渐降低的倾向。 另外，如上所述，近年来从大量生产、大量纯化的需要考虑，则期望进一步提高蛋白质吸附多孔膜的吸附能力。作为提高吸附能力的方法，使蛋白质多层地吸附于有限的膜的细孔表面的方法很有效，但越是使更多的蛋白质多层地吸附于有限的膜的细孔表面，则越降低蛋白质吸附多孔膜再生而重复使用时的吸附能力，结果使这样的课题变得更显著。用于解决问题的方案 吸附能力降低的原因之一，是因为全部被吸附的蛋白质无法完全溶出。因此，如果能够提高被吸附蛋白质的溶出效率，并使蛋白质吸附多孔膜再生，就可以抑制因重复使用而引起的吸附能力的降低。 本专利技术人等为了解决上述课题进行了潜心研究的结果发现，通过使至少I种溶出液沿着与吸附工序中的含有吸附对象蛋白质的原液的通过方向相反的方向通过，可以解决上述课题而完成本专利技术。此外，本专利技术人等还发现，通过多层地吸附蛋白质的蛋白质吸附多孔膜，则上述方法可以更有效地发挥作用，于是完成了本专利技术。 即，本专利技术如下所述。一种，其是利用多孔膜进行的，所述多孔膜是基体材料表面被具有蛋白质吸附能力的高分子覆盖而形成的多孔膜， 该方法包括: 吸附工序，使含有吸附对象蛋白质的原液通过所述多孔膜，使该吸附对象蛋白质吸附于所述高分子；· 溶出工序，使溶出液通过所述多孔膜，使吸附于所述高分子的所述吸附对象蛋白质溶出在该溶出液中， 在所述溶出工序中，使至少I种溶出液沿着与所述吸附工序中所述原液的通过方向相反的方向通过。如所述的，其中，所述溶出液选自:含有盐的水溶液、调整了PH的水溶液、水、有机溶剂及它们的混合溶液。如或所述的，其中，在所述溶出工序中，使所述溶出液沿着与所述吸附工序中所述原液的通过方向相同的方向和相反的方向通过。如~中任一项所述的，其中，所述高分子接枝于所述基体材料表面，且所述高分子的接枝率为5%以上且200%以下。如所述的，其中，所述高分子的接枝率为30%以上且90%以下。如~中任一项所述的，其中，所述多孔膜为离子交换膜，且所述溶出液包含含有盐的水溶液或调整了 PH的水溶液。如~中任一项所述的，其中，所述多孔膜的多层度为1.1以上。如或所述的，其中，所述多孔膜为弱碱性阴离子交换膜或弱酸性阳离子交换膜，且所述溶出工序包括: 使PH调整为所述吸附对象蛋白质的等电点和所述多孔膜的等电点之间以外的水溶液通过的工序、以及 使含有盐的水溶液通过的工序， 在上述至少一个工序中，沿着与所述吸附工序中所述原液的通过方向相反的方向通过水溶液。如所述的，其中，在使调整了 pH的水溶液通过的所述工序及使含有盐的水溶液通过的所述工序中，沿着与所述吸附工序中所述原液的通过方向相反的方向通过水溶液。如或所述的，其中，所述多孔膜为弱碱性阴离子交换膜或弱酸性阳离子交换膜，并且， 所述溶出工序包含: 使含有盐的水溶液通过的第一工序； 使PH调整为所述吸附对象蛋白质的等电点和所述多孔膜的等电点之间以外的水溶液通过的第二工序；以及 使含有盐的水溶液通过的第三工序， 在所述第一工序中，沿着与所述吸附工序中所述原液的通过方向相同的方向通过水溶 液， 在所述第二工序及所述第三工序中，沿着与吸附工序中所述原液的通过方向相反的方向通过水溶液。如~中任一项所述的，其中，所述溶出液被调整为所述吸附对象蛋白质稳定的pH。如~中任一项所述的，其中，所述溶出液为含有0.3mol/L以上的中性盐的水溶液。如~中任一项所述的，其中，其中，所述多孔膜是在通过液体或蒸汽进行了湿润化的状态下进行加热至50~110°C的处理而制造的。 专利技术效果 按照本专利技术，可提供一种被吸附蛋白质的溶出方法，用于在使用蛋白质吸附多孔膜的中抑制蛋白质的吸附能力的降低。【具体实施方式】 下面，对本专利技术的优选的实施方式详细地进行说明。但是，本专利技术并不限定于以下的实施方式，可以在其主旨的范围内进行各种变形而实施。 本实施方式的为如下方法:含有吸附工序和溶出工序，在溶出工序中，使至少I种溶出液沿着与吸附工序中含有吸附对象蛋白质的原液的通过方向相反的方向通过。 本实施方式中所使用的多孔膜，是含有基体材料和包覆于该基体材料表面且具有蛋白质吸附能力的高分子的膜，有时记为“蛋白质吸附多孔膜”。 另外，在本实施方式中，所谓“蛋白质吸附多孔膜”作为如下概念使用:该概念包含在称为整块体的具有一条或多条中空部的圆筒状多孔烧结体上包覆具有蛋白质吸附能力的高分子而形成的形态。因此，在本实本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种蛋白质纯化方法，其是利用多孔膜进行的蛋白质纯化方法，所述多孔膜是基体材料表面被具有蛋白质吸附能力的高分子覆盖而形成的多孔膜，该方法包括：吸附工序，使含有吸附对象蛋白质的原液通过所述多孔膜，使该吸附对象蛋白质吸附于所述高分子；溶出工序，使溶出液通过所述多孔膜，使吸附于所述高分子的所述吸附对象蛋白质溶出在该溶出液中，在所述溶出工序中，使至少1种溶出液沿着与所述吸附工序中所述原液的通过方向相反的方向通过。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：佐藤优太，篠原直志，白泷浩伸，
申请(专利权)人：旭化成化学株式会社，
类型：发明
国别省市：日本;JP