用于制备进行检查的细胞学样品的系统和试剂盒技术方案

本发明专利技术涉及制备细胞学样品以进行检查的系统或试剂盒，其包含固定剂以固定所述样品中包含的细胞，细胞表面修饰剂以修饰所述样品中包含的细胞表面，具有至少两个面的第一样品支持装置，具有至少两个面的第二样品支持装置，其中至少一个支持装置上的至少一个面上沉积有细胞质染料或核染料(图1)。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于制备进行检查的细胞学样品的系统和试剂盒专利
本专利技术涉及细胞学样品的显微镜检查领域。专利技术背景子宫颈癌在全世界的女性中是第二位最常见的癌症，在发展中国家是导致女性因癌症死亡的主要因素。妇女中有大约30%的癌症是子宫颈癌，例如在印度每年诊断超过100,000个新病例。子宫颈癌病例的预计年复合增长率(CAGR)是2.56%，以这个增长速度在2012年将检测到大约175,000例的子宫颈癌新病例。筛查子宫颈癌的一种推荐工具是在帕帕尼科拉乌测试(Papanicolaoutest)(也称作Pap-涂片、Pap-试验、宫颈涂片或者涂片试验)中检测癌症的细胞学前体，这是用于妇科学中的一种筛查检查，用以检测子宫颈管特别是变性带中的恶化前和恶性病变。在取Pap涂片时，使用阴道窥器从子宫颈的外口和宫颈内膜取细胞。在显微镜下检查细胞以观察异常情况。该测试目的在于检测由性传播人乳头瘤病毒导致的潜在的癌前改变。该测试仍然是早期检测癌前和子宫颈癌的一种有效的广泛使用的方法。该测试还可检测宫颈内膜和子宫内膜中的感染和异常。这种方法在发达国家有效地降低了子宫颈癌的发生率。然而，目前的Pap染色是冗长且耗时的。此外，需要的步骤数和方法学使其整个过程非常难以自动化，而且难以在床旁(pointofcaresetting)实施，这意味着样品不能在床旁分析，必须送至实验室分析。文献GB1555507A教导了一种生产的载玻片，其中将一定量的透明树脂于包含有机化合物和水的溶剂混合物中的粘性溶液施加于小于盖玻片面积的载玻片的面积，将具有生物学染料涂层的盖玻片置于载玻片上所述粘性溶液上，其染料涂覆侧与粘性溶液接触，并使所述盖玻片静止一定时间。文献GB1557722A揭示了一种染色和密封经空气干燥并固定在显微镜载玻片的生物学样品的方法，其中提供了透明树脂与生物学染料在包含水的溶剂混合物中的粘性液体配制物，一定量的粘性液体配制物被施加于固定的生物学样品上比盖玻片面积小的面积，所述盖玻片施加于所述施加量的粘性液体配制物，所述盖玻片保持静止直至溶解于所述液体配制物中的染料与样品接触并对其染色。美国专利No.3,796,594教导了染料涂覆的载玻片以差别染色血液。美国专利No.3,834,874教导了预染色的显微镜载玻片，其具有用亚甲蓝NN和醋酸甲酚紫的干混合物覆盖的表面，以检测血液中的疟原虫。文献EP0291153A1描述了一种显微镜载玻片组件，其中两个矩形载玻片以其正面彼此面对，但是彼此通过凸起部分和凸起的岛(raisedislands)保持一定距离，由此在两个载玻片之间提供毛细间隙。美国专利4,224,277教导了一种装置，用于涂覆由所述装置产生的载玻片和预涂覆的显微镜载玻片。专利技术概述根据本专利技术的第一方面，提供了用于制备进行检查的细胞学样品的系统或者试剂盒。所述系统或者试剂盒包含固定所述样品中包含的细胞的固定剂，修饰所述样品中包含的细胞表面的细胞表面修饰剂，具有至少两个面的第一样品支持装置，及具有至少两个面的第二样品支持装置，其中至少一个支持装置的至少一个面上沉积有细胞质染料或者核染料。如本文所用，“细胞学样品”被定义为来自生物体、优选哺乳动物的数量足够进行鉴别和/或分析的任何样品。细胞学样品非限制性例子包括细胞样品、皮肤样品、组织样品和粘膜样品。如本文所用，术语“固定剂”是指一种组合物，其可以是或者不是液体形式，其固定细胞学样品，由此使所述细胞学样品被附着于载玻片足够的时间以鉴别和/或分析该细胞学样品。如本文所用，术语“细胞表面修饰”是指处理细胞，由此细胞是非折叠的和/或非卷曲的，和/或细胞重叠减少。在样品制备期间细胞折叠和卷曲的减少将增强细胞和形态学细节的观测，用于随后检测样品中的异常细胞，例如在子宫颈癌筛查中。细胞重叠的减少将改善细胞分散，这特别在细胞悬浮液中是重要问题，在细胞悬浮液中细胞趋于彼此重叠，特别是非常小的并趋于聚集及位于大细胞上的多形性。一般地，这两个目的都可以通过增加细胞的表面电荷实现，使得各个细胞之间排斥增加及因此提供更好的分散。核染色是当样品沉积在所述第一样品支持装置上或者由所述第一样品支持装置覆盖时对样品中包含的细胞的细胞核染色。细胞质染色是当样品沉积在所述第二样品支持装置上或者由所述第二样品支持装置覆盖时对样品中包含的细胞的细胞质染色。这种系统或试剂盒提供了制备细胞学样品的选项，由此样品中的细胞以适于通过显微镜观测或者适于通过自动化光学细胞分析装置分析的形式分散。因此，本专利技术的一个重要特征是可以对指定样品进行现场染色，即即时(PointofCare)分析。此外，不再需要在该位点制备染色溶液，因为染料以合适量预先分布在样品支持装置上。进一步地，不再需要进行复杂的方案和多步骤染色程序，并且在染色期间基本上由于灰尘和杂质所致的污染问题也被消除。再者，由于染料是以最佳染色需要的精确量分布的事实也使得例如过度染色或者染色不足等偏差最小化。另一优势是pH条件可以容易控制，这是细胞质染色(在一些情况中酸性pH是有利的)及核染色(在一些情况中碱性pH是有利的)必需的。其上已经沉积有染料的样品支持装置的使用使得可以在密闭环境中进行染色，即在样品筒(cartridge)中，这进一步消除了灰尘和杂质并增加了染色程序的可再现性。在一个优选的实施方案中，提供了第一和/或第二样品支持装置的仅一个面具有各自的染料。然而，可以有利的是第一和/或第二样品支持装置的两个面均具有染料，在这种情况中，技术人员操作该系统时不需要考虑该支持装置的哪个面面对样品。在这种实施方案中，避免了由于使用第一和/或第二样品支持装置的错误面所致人为假象。根据本专利技术的第二方面，提供了一种制备进行检查的细胞学样品的方法，所述方法包括如下步骤：用固定剂固定所述样品中包含的细胞，用细胞表面修饰剂修饰所述样品中包含的细胞的表面，提供具有至少两个面的第一样品支持装置，及具有至少两个面的第二样品支持装置，其中至少一个支持装置的至少一个面上沉积有细胞质染料或核染料，将细胞沉积在第一或者第二样品支持装置上，及分别用第二或第一样品支持装置覆盖沉积的细胞。重要的是要理解这个方法的步骤不是必须以上述顺序进行。因此，本专利技术包括使用至少一种类型的预制样品支持装置。这些预制的样品支持装置用核染料或者用细胞质染料涂覆。在本专利技术优选的实施方案中，核染料沉积在第一样品支持装置的至少一个面，细胞质染料沉积在第二样品支持装置的至少一个面。或者，两个样品支持装置的仅一个用染料涂覆(例如核染料)，而另一类型染料/如细胞质染料例如与固定剂和/或细胞表面修饰剂一起加入细胞悬浮液中。在本专利技术优选的实施方案中，第一样品支持装置和/或第二样品支持装置是载玻片和/或盖玻片形式。如本文所用，术语“载玻片(slide)”是指由玻璃或塑料制成的小的透明平板，其上可以沉积样品如细胞以在光学放大装置如显微镜下检查。如本文所用，术语“盖玻片（coverslip）”是指由玻璃或塑料制成的小的透明平板，其用于覆盖样品如细胞，之后在光学放大装置如显微镜下检查。根据一般理解，载玻片和盖玻片的大小和厚度不同。在ISO8255-2标准下，显微镜载玻片的大小为26×76mm，厚度为1mm，而盖玻片通常大小为18×18mm，厚度为100–200μm本文档来自技高网...

【技术保护点】
制备用于检查的细胞学样品的系统或试剂盒(100)，所述系统或试剂盒包含：固定剂，用以固定所述样品中包含的细胞，细胞表面修饰剂，用以修饰所述样品中包含的细胞的表面，第一样品支持装置(103)，其具有至少两个面，及第二样品支持装置(105)，其具有至少两个面，其中至少一个所述支持装置的至少一个面上沉积有细胞质染料或核染料。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2011.09.13 US 61/534,0451.制备用于检查的细胞学样品的系统，所述系统包含：固定剂，用以固定所述样品中包含的细胞，细胞表面修饰剂，用以修饰所述样品中包含的细胞的表面，第一样品支持装置(103)，其具有至少两个面，及第二样品支持装置(105)，其具有至少两个面，其中核染料沉积在所述第一样品支持装置的至少一个面上，并且细胞质染料沉积在所述第二样品支持装置的至少一个面上。2.权利要求1的系统，其中所述第一样品支持装置和/或所述第二样品支持装置是载玻片和/或盖玻片形式。3.权利要求1的系统，其中所述第一样品支持装置和所述第二样品支持装置通过铰链彼此连接。4.权利要求1的系统，其中所述固定剂和/或细胞表面修饰剂以液体形式提供。5.权利要求1的系统，其中所述固定剂包含选自如下一组的至少一种试剂：·乙醇·异丙醇·醋酸·甲醛·戊二醛。6.权利要求5的系统，其中所述醋酸是冰醋酸。7.权利要求1的系统，其中所述固定剂是包括乙醇、异丙醇和冰醋酸的混合物。8.权利要求7的系统，其中乙醇、异丙醇和冰醋酸体积比率为7:2:1。9.权利要求1的系统，其中所述固定剂包含戊二醛和磷酸盐缓冲盐水。10.权利要求9的系统，其中2％–20％w/w的戊二醛于0.1M-1M磷酸盐缓冲盐水中。11.权利要求1的系统，其中所述固定剂的pH为5-6.5。12.权利要求1的系统，其中所述细胞表面修饰剂包含选自如下一组的至少一种试剂：·使得细胞表面具有正电荷的试剂，·使得细胞表面具有负电荷的试剂，·螯合剂，·抗凝剂，·去粘液化剂；·支持细胞分散的试剂，和/或·在细胞表面产生微孔的试剂。13.权利要求1的系统，其中提供细胞制备混合物，所述细胞制备混合物包含固定剂和细胞表面修饰剂。14.权利要求1的系统，其中所述核染料包含选自如下一组的至少一种：·卡红·亚甲蓝·中性红/二苯乙烯红·苏木精·番红精·尼罗蓝。15.权利要求1的系统，其中所述细胞质染料包含选自如下一组的至少一种：·伊红·Alicianblue·二甲苯胺丽春红·猩红·Tartazine·范吉逊染剂·赖特染剂。16.权利要求1的系统，其中第一和第二样品支持装置构造为由自动化装置接受以染色样品。17.权利要求1的系统，其中所述细胞学样品是子宫颈样品。18.权利要求1的系统，其中所述细胞学样品选自：·涂片样品·组织切片，和/或·液体样品。19.制备用于检查的细胞学样品的试剂盒，所述试剂盒包含：固定剂，用以固定所述样品中包含的细胞，细胞表面修饰剂，用以修饰所述样品中包含的细胞的表面，第一样品支持装置(103)，其具有至少两个面，及第二样品支持装置(105)，其具有至少两个面，其中核染料沉积在所述第一样品支持装置的至少一个面上，并且细胞质染料沉积在所述第二样品支持装置的至少一个面上。20.权利要求19的试剂盒，其中所述第一样品支持装置和/或所述第二样品支持装置是载玻片和/或盖玻片形式。21.权利要求19的试剂盒，其中所述第一样品支持装置和所述第二样品支持装置通过铰链彼此连接。22.权利要求19的试剂盒，其中所述固定剂和/或细胞表面修饰剂以液体形式提供。23.权利要求19的试剂盒，其中所述固定剂包含选自如下一组的至少一种试剂：·乙醇·异丙醇·醋酸·甲醛·戊二醛。24.权利要求23的试剂盒，其中所述醋酸是冰醋酸。25.权利要求19的试剂盒，其中所述固定剂是包括乙醇、异丙醇和冰醋酸的混合物。26.权利要求25的试剂盒，其中乙醇、异丙醇和冰醋酸体积比率为7:2:1。27.权利要求19的试剂盒，其中所述固定剂包含戊二醛和磷酸盐缓冲盐水。28.权利要求27的试剂盒，其中2％–20％w/w的戊二醛于0.1M-1M磷酸盐缓冲盐水...

【专利技术属性】
技术研发人员：S·库马尔，S·贾亚万特，S·K·奈克，P·凯瑟沃浦，B·查克拉巴蒂，
申请(专利权)人：皇家飞利浦有限公司，
类型：
国别省市：