本发明专利技术公开了一种食品中草铵磷、草甘膦和氨甲基磷酸残留量的测定方法。本发明专利技术的样品前处理是用甲醇水溶液提取食品样品中的草铵磷、草甘膦和氨甲基磷酸，再选择C18分散固相萃取剂对提取液进行净化，过滤后经衍生，结合高效液相色谱-串联质谱实现3种化合物同时定性和定量测定。显然本发明专利技术的方法操作简便、重现性好，有效去除样品提取液中的杂质，前处理是对已有QuEChERS方法的补充和改进，回收率可达70.5%～91.2%，相对标准偏差为4.5%～7.3%，定量限50μg/kg。完全满足我国和欧盟、美国、日本对安全检测的技术要求，将为保障我国人民食品安全及对外出口贸易健康发展提供有力的技术支撑。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了一种。本专利技术的样品前处理是用甲醇水溶液提取食品样品中的草铵磷、草甘膦和氨甲基磷酸，再选择C18分散固相萃取剂对提取液进行净化，过滤后经衍生，结合高效液相色谱-串联质谱实现3种化合物同时定性和定量测定。显然本专利技术的方法操作简便、重现性好，有效去除样品提取液中的杂质，前处理是对已有QuEChERS方法的补充和改进，回收率可达70.5%～91.2%，相对标准偏差为4.5%～7.3%，定量限50μg/kg。完全满足我国和欧盟、美国、日本对安全检测的技术要求，将为保障我国人民食品安全及对外出口贸易健康发展提供有力的技术支撑。【专利说明】
本专利技术属于农药残留量的测定
，具体地说涉及一种草铵磷、草甘膦和氨甲基磷酸残留量测定方法。
技术介绍
草甘膦(glyphosate，PMG)是美国孟山都公司于20世纪70年代开发的广谱灭生性除草剂，是除草活性最强的有机磷农药，它的杀草谱广，通过茎叶吸收后传导到植物各部位的，可防除单子叶和双子叶、一年生和多年生、草本和灌木等40多科的植物。因具有用药成本低、传导性强、药效好、环境兼容性优良等特点而被广泛使用。氨甲基磷酸(aminomethyl phosphonic acid,AMPA)是草甘膦在植物、土壤及水中的主要代谢产物。草铵膦(glufosinate，GLUF)是赫斯特公司于上世纪80年代开发的新型灭生性除草剂，是广谱、触杀型、灭杀性除草剂，采用杂草茎叶定向喷雾处理，几乎可以用于各种宽行种植的果树、中耕作物、蔬菜和非耕地。草甘膦和草铵膦虽然属于低毒类有机磷除草剂，但不合理使用会导致植物产品中草甘膦和草铵膦的残留超标，影响消费者的食用安全，同时也会影响相关产品的国际贸易。显然随着草甘膦和草铵膦的推广和使用，寻求和建立食品中草铵磷、草甘膦和氨甲基磷酸残留量的检测方法具有重要意义。QuEChERS方法作为新发展起来的样品前处理技术，是代表快速、简单、价廉、高效、稳定和安全(Quick、Easy、Cheap、Effective、Rugged、Safe)的样品前处理方法。具有回收率高，分析农药范围广，处理速度快，溶剂使用量少，操作简便等优点。目前国际广泛认可使用的QuEChERS方法有欧盟制定的EN15662和美国官方分析化学师协会的A0AC2007.01标准方法。方法包括提取、净化2个步骤:1用乙腈或含1%乙酸的乙腈提取样品，通过加入缓冲盐混合物进行盐析萃取实现乙腈和样品所在水相的液-液分离；2用分散固相萃取剂和无水硫酸镁对提取溶液净化，分散固相萃取剂依据样品基质和待测化合物的性质，可选择PSA、GCB、C18EC等，但都加入无水硫酸镁以去除中乙腈中残留的水分。草铵膦、草甘膦和氨甲基磷酸分子式中都同时含有膦酸基、羟基、氨基，是极强的两性化合物，极易溶于用水，因此难以用乙腈从水相中萃取，无法采用现有QuEChERS方法进行样品前处理。前处理通常采用固相萃取柱净化，方法较复杂，回收率低，对操作人员要求较高；也有方法不经净化直接检测，基质干扰大，对检测仪器污染严重。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种食品中草铵膦、草甘膦和氨甲基磷酸残留量的测定方法，以弥补现有技术的不足。本专利技术的另一目的是提供一种样品前处理方法，以弥补现有国际广泛认可使用的QuEChERS方法无法用于草铵膦、草甘膦和氨甲基磷酸这三种农药残留检测的不足。本专利技术的测定首先是对样品的前处理，即对已有QuEChERS方法的补充和改进，这是由于草铵膦、草甘膦和氨甲基磷酸极易溶于水的特性决定，现有QuEChERS方法用乙腈或含1%乙酸的乙腈从水相中盐析萃取的提取方法无法实用，本专利技术选用甲醇水溶液为提取溶剂从样品中直接提取，保证了上述农药的提取效率。在净化步骤，因为考虑到提取溶剂主要是水，所以现有方法加入无水硫酸镁以去除提取液中残余水分的方法并不可行，因此本专利技术用分散固相萃取剂对提取液进行净化，而不加入无水硫酸镁。因此，本专利技术的检测，其前处理是首先用甲醇水溶液提取食品样品中的草铵膦、草甘膦和氨甲基磷酸，再选择C18分散固相萃取剂对提取液进行净化，衍生，最后结合高效液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)实现上述三种农药同时定性和定量测定。本专利技术的测定方法包括如下步骤:(I)提取称取经均质化的食品样品于具塞塑料离心管中，加甲醇水溶液均质提取lmin，涡旋振荡Imin，离心；(2)净化移取(I)获得的上清液于塑料离心管中，加入基质分散固相萃取剂，涡旋振荡，离心，吸取上清液过0.22 μ m滤膜，待衍生；(3)标准工作溶液的配制将空白样品按上述步骤(I)、(2)处理，用该空白样品基质溶液在50?1000 μ g/L范围内，配制至少三个浓度的草铵磷、草甘膦和氨甲基磷酸系列基质标准工作溶液，待衍生。(4)衍生将步骤(2)和步骤(3)中所得待衍生溶液分别加入硼酸钠溶液和9-芴基氯甲酸酯丙酮溶液，混匀，衍生2h。衍生后的样品液和系列基质标准工作液待测定。 (5)液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)测定a)定量测定:将步骤(4)中衍生后的系列基质标准工作液进行LC-MS/MS测定，以基质标准工作液的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准工作曲线；在相同条件下将步骤(4)中衍生后的样品液注入LC-MS/MS进行测定，测得样品液中农药的色谱峰面积，代入标准曲线，得到样品液中农药含量，然后根据样品液所代表试样的质量计算得到样品中农药残留量。b)定性测定:检测步骤(4)中衍生后样品液中目标化合物母离子和子离子对，若其离子色谱峰保留时间与标准工作溶液一致；且样品液中目标化合物的两个子离子的相对丰度与浓度相当基质标准溶液的相对丰度偏差不超过30%时，则判断该样品中存在该种目标化合物；若上述两个条件不能同时满足，则判断不含该种目标化合物。上述步骤(2)优选甲醇水溶液的体积浓度为20%。上述步骤(2)中基质分散固相萃取剂为C18，每毫升提取液中C18为50mg。上述步骤(4)中硼酸钠溶液浓度为5%，每毫升待衍生样品液或标准工作溶液中加A 0.2mL。上述步骤(4)中9-芴基氯甲酸酯丙酮溶液的浓度为1.0g/L，每毫升待衍生样品液或标准工作溶液中加入0.2mL。上述步骤(5)中液相色谱的流动相为A:含5mmol/L乙酸铵的水溶液(pH9)，流动相B:乙腈,流速0.2-0.4mL/min,进样量10 μ L。上述步骤(5)中液相色谱使用梯度洗脱的方法，梯度洗脱的程序为:【权利要求】1.一种，其特征在于包括如下步骤: (1)提取 称取经均质化的食品样品于具塞塑料离心管中，加甲醇水溶液，涡旋振荡，离心； (2)净化 移取(I)获得的上清液于塑料离心管中，加入基质分散固相萃取剂，涡旋振荡，离心，吸取上清液过0.22 μ m滤膜，得到样品液待衍生； (3)配制基质标准工作溶液 将空白样品按上述步骤(1)、(2)处理，用该空白样品基质溶液在50~1000 μ g/L范围内，配制至少三个浓度的草铵磷、草甘膦和氨甲基磷酸系列基质标准工作溶液，待衍生； (4)衍生 将步骤(2)和步骤(3)中所得待衍生溶液分别加入硼酸钠溶液和9-芴基氯甲酸酯丙酮溶液，混匀，衍生2h ;衍生后的样品液和系列基质标准工作液待测定本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种食品中草铵磷、草甘膦和氨甲基磷酸残留量的测定方法，其特征在于包括如下步骤：（1）提取称取经均质化的食品样品于具塞塑料离心管中，加甲醇水溶液，涡旋振荡，离心；（2）净化移取（1）获得的上清液于塑料离心管中，加入基质分散固相萃取剂，涡旋振荡，离心，吸取上清液过0.22μm滤膜，得到样品液待衍生；（3）配制基质标准工作溶液将空白样品按上述步骤（1）、（2）处理，用该空白样品基质溶液在50～1000μg/L范围内，配制至少三个浓度的草铵磷、草甘膦和氨甲基磷酸系列基质标准工作溶液，待衍生；（4）衍生将步骤（2）和步骤（3）中所得待衍生溶液分别加入硼酸钠溶液和9?芴基氯甲酸酯丙酮溶液，混匀，衍生2h；衍生后的样品液和系列基质标准工作液待测定；（5）液相色谱?串联质谱法（LC?MS/MS）测定质谱检测使用多反应监测扫描模式，草甘膦的母离子392，子离子分别为214和88，氨甲基磷酸的母离子334，子离子分别为112和179，草铵磷的母离子404.1，子离子分别为136和182；a)定量测定：将步骤（4）中衍生后的系列基质标准工作液进行LC?MS/MS测定，以基质标准工作液的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准工作曲线；在相同条件下将步骤（4）中衍生后的样品液注入LC?MS/MS进行测定，测得样品液中农药的色谱峰面积，代入标准曲线，得到样品液中农药含量，然后根据样品液所代表试样的质量计算得到样品中农药残留量；b)定性测定：检测步骤（4）中衍生后样品液中目标化合物母离子和子离子对，若其离子色谱峰保留时间与标准工作溶液一致；且样品液中目标化合物的两个子离子的相对丰度与浓度相当基质标准溶液的相对丰度偏差不超过30%时，则判断该样品中存在该种目标化合物；若上述两个条件不能同时满足，则判断不含该种目标化合物。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：刘靖靖，孙忠松，崔淑华，
申请(专利权)人：山东出入境检验检疫局检验检疫技术中心，
类型：发明
国别省市：
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