本发明专利技术提供了包含与靶核酸3’端和5’端互补的互补区的多核苷酸、包含所述多核苷酸的组合物和试剂盒，以及产生与靶核酸互补的核苷酸序列的方法。相应地，与靶核酸3’端结合的区域被缩短，靶核酸被扩增以具有优良的特异性。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术提供了包含与靶核酸3’端和5’端互补的互补区的多核苷酸、包含所述多核苷酸的组合物和试剂盒，以及产生与靶核酸互补的核苷酸序列的方法。相应地，与靶核酸3’端结合的区域被缩短，靶核酸被扩增以具有优良的特异性。【专利说明】相关申请的交叉引用本申请要求2012年11月19日提交至韩国知识产权局的韩国专利申请10-2012-0131026的权益，该专利申请的公开内容通过引用全部并入本文。
本公开涉及，所述多核苷酸包含与靶核酸3’端和5’端互补的互补区。
技术介绍
核酸的扩增方法包括在有核酸聚合酶的情况下从引物的3’端延伸核苷酸序列。引物包含与靶核酸互补的序列。为了延伸核苷酸序列，引物和靶核酸必须能够特异并稳定地相互杂交。对于短核酸，引物设计是困难的。已知核酸杂交产物的稳定性与互补序列的长度成比例。此外，如果增加引物的长度，需要扩增的靶核酸长度就会缩短。因此，仍有需要发展这样的多核苷酸，所述多核苷酸中引物能够特异并稳定地结合靶核酸，同时被扩增的靶核酸的特异性得以提高。专利技术概述 本专利技术提供了包含与靶核酸3’端和5’端互补的互补区的多核苷酸。本专利技术提供了用于靶核酸扩增的组合物，所述组合物包含含有与所述靶核酸3 ’端和5’端互补的互补区的多核苷酸。本专利技术提供了用于靶核酸扩增的试剂盒，所述试剂盒包含含有与所述靶核酸3 ’端和5’端互补的互补区的多核苷酸。本专利技术提供了产生与靶核酸互补的核苷酸序列的方法，所述方法使用包含与所述靶核酸3’端和5’端互补的互补区的多核苷酸。【专利附图】【附图说明】由以下对实施方案的描述，结合附图，可以看出并且更容易理解这些和/或其他方面。图1的示意图展示了本专利技术实施方案所述的多核苷酸，以及本专利技术实施方案所述的产生与靶核酸互补的核苷酸序列的方法；图2的示意图展示了本专利技术实施方案所述的多核苷酸的引发效果；图3的示意图展示了按照第一互补区和第二互补区长度的引发效果；图4的示意图展示了使用本专利技术实施方案所述的多核苷酸的检测灵敏度；图5A至5C的示意图展示了靶核酸(分别为miR-16、miR-21和miR-206)的检测灵敏度；图6A和6B的示意图展示了靶核酸(分别为miR-16和miR-210)的特异性。专利技术详述现详细参考实施方案，所述实施方案的例子在附图中进行了举例说明，附图中同样的编号在各附图中指代相同的部分。就这方面来说，这些实施方案可以具有不同的形式，不应当理解为仅限于本文给出的描述。相应地，通过参考图表，下文对实施方案的描述仅用于解释本说明书的各个方面。本文中，术语“和/或”包括一或多个相关列举项的任何和所有组合。诸如“至少一个”的表达方式，当位于元件列表之前时修饰的是整个元件列表，不是修饰列表中的个别元件。根据本专利技术的实施方案，提供了多核苷酸，所述多核苷酸包含第一互补区和第二互补区，所述第一互补区与靶核酸3’端的至少两个连续核苷酸互补；所述第二互补区与靶核酸5’端的至少两个连续核苷酸互补；其中第一互补区位于第二互补区的3’端方向。所述多核苷酸的第一互补区可以与靶核酸3’端的至少两个连续核苷酸互补。例如，多核苷酸的第一互补区可以与靶核酸3’端的2个核苷酸(2nt)、3nt、4nt、5nt、6nt或7nt互补。例如，第一互补区的长度可以是2nt-7nt。第一互补区可以包含DNA、RNA、肽核酸(PNA)、锁核酸(LNA)或核苷酸类似物。所述多核苷酸的第二互补区可以与靶核酸5’端的至少两个连续核苷酸互补。例如，多核苷酸的第二互补区可以与祀核酸5’端的3nt、4nt、5nt、6nt、7nt、8nt、9nt、10nt、lint、12nt、13nt、14nt、15nt、16nt、17nt、18nt、19nt 或 20nt 互补。例如，第二互补区的长度可以是3nt-20nt。第二互补区可以包含DNA、RNA、肽核酸(PNA)、锁核酸(LNA)或核苷酸类似物。所述多核苷酸的第一互补区可以位于第二互补区的3’端方向。第一互补区和第二互补区可以没有隔开，或者可以相距至少一个核苷酸。所述多核苷酸可以是DNA或RNA。此外，所述多核苷酸可以是核苷酸类似物，例如PNA和LNA。例如，所述多核苷酸的第二互补区可以包含核苷酸类似物，例如PNA和LNA。可以不仅在第二互补区而且在第一互补区中含有核苷酸类似物，例如PNA和LNA。多核苷酸可以是单链的。多核苷酸的长度可以是7nt-200nt、7nt-180nt、7nt-150nt、7nt-130nt、7nt-100nt、7nt-80nt、7nt-50nt、7nt-30nt、7nt-20nt、7nt_15nt 或 IOnt - 40nt。靶核酸可以是DNA、RNA、或者DNA和RNA的嵌合体。靶核酸可以是单链或者双链的。祀核酸的长度可以是 15nt_200nt、15nt_180nt、15nt_150nt、15nt_130nt、15nt_100nt、15nt_80nt、15nt_50nt、15nt_40nt 或者 15nt_30nt。祀核酸可以是小 RNA。例如，小 RNA 可以是非编码RNA、micro RNA(miRNA)、小干扰RNA(siRNA)、tRNA或脱帽mRNA。真核细胞的天然mRNA带有5’ -帽子。但在保存或处理生物样品或从中分离的mRNA的过程中，mRNA可能发生降解。这种情况中，分离的产物可以没有天然RNA的5’帽子。5’-帽子是mRNA5’端核糖的5’ -OH与7-甲基鸟苷酸通过三磷酸键连接形成的结构，或者是所述连接的分解产物鸟苷酸与mRNA5’端核糖的5’ -OH连接形成的结构。此外，靶核酸可以是含有至少200个核苷酸的RNA，在这种情况下，所述RNA可以是，含有GC含量小于30%或者至少80%的30个连续核苷酸的区域的RNA ;包含具有互补序列的至少5个连续核苷酸从而能够形成分子内二级结构的RNA ;包含相互互补的至少5个连续核苷酸的RNA ;或者它们的组合。所述多核苷酸可以还包含位于多核苷酸第二互补区5’端方向的不与靶核酸互补的第三区域。例如，所述第三区域可以位于第二互补区的5’端方向。例如，多核苷酸可以处于5’-第三区域-第二互补区-第一互补区-3’的形式。多核苷酸的第三区域的长度可以是 3nt_200nt。第三区域的例子可以包含 3nt-200nt、3nt-180nt、3nt-150nt、3nt-130nt、3nt-100nt、3nt-80nt、3nt-50nt、3nt-40nt或者3nt_30nt。所述第三区域可以包含引物序列、限制性酶识别位点、或者探针结合位点。第三区域可以包含DNA、RNA、肽核酸(PNA)、锁核酸(LNA)或者核苷酸类似物。第三区域和第二互补区可以没有隔开或者相距至少lnt。这种情况中，连接分子可以包含引物结合位点、限制性酶识别位点或者探针结合位点。多核苷酸可以作为模板依赖性核酸合成中的引物。因此，多核苷酸可以作为引物使用。多核苷酸还可以作为用于证实样品中靶核酸的存在的探针。多核苷酸可以含有位于第一互补区和第三区域之间的第二互补区，以便缩短第一互补区的长度并且增加通过逆转录产生的DNA的长度。DNA长度的增加使得更容易设计RNA的特异引物。此外，第二互补区的存在可以提高靶核酸检测本文档来自技高网...
【技术保护点】
包含第一互补区和第二互补区的多核苷酸，所述第一互补区与靶核酸3’端的至少两个连续核苷酸互补，所述第二互补区与靶核酸5’端的至少两个连续核苷酸互补，其中第一互补区位于第二互补区的3’端方向。
【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：朴东贤，洪性宇，朴卿希，李妙龙，
申请(专利权)人：三星电子株式会社，
类型：发明
国别省市：韩国;KR
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