G418抗性标记在农杆菌介导的木霉遗传转化中的应用制造技术

技术编号：10091814 阅读：311 留言：0更新日期：2014-05-28 15:17

本发明专利技术涉及G418抗性标记的农杆菌介导的木霉遗传转化中的应用，以G418的抗性为木霉抗性筛选标记。该农杆菌介导的木霉遗传转化方法包括将G418抗性基因与经过酶切并去磷酸化的载体p1300连接成p1300-neo载体；农杆菌菌株活化并培养至OD600值为0.3～0.6，并用15～25mmol/L CaCl2重悬菌体，制备农杆菌感受态细胞；将p1300-neo载体与农杆菌感受态细胞混匀，35～40℃保温至少3min，用LB培养基在25～35℃培养，再用含卡那霉素和利福平的YEB培养基培养并筛选出重组农杆菌；将处于对数生长期且OD660值为0.6～0.8的活化的重组农杆菌菌液与木霉分生孢子悬液混匀并诱导培养，再用含G418的M-100培养基在25～30℃培养并筛选出抗G418的木霉。本发明专利技术为木霉菌增加了一种新的抗性选择标记，为研究木霉的基因功能带来了巨大方便，而且价格便宜。