本发明专利技术涉及疾病生物标志物用途领域，公开了肝硬化生物标志物VWF和ADAMTS13及其在肝硬化诊断试剂中的用途。本发明专利技术所述VWF由氨基酸序列在NCBI数据库中登录号为GI317373549的蛋白质组成，所述ADAMTS13由氨基酸序列在NCBI数据库中登录号为GI74749836的蛋白质组成。以生物标志物VWF和ADAMTS13对被试者进行肝硬化诊断，具有简单易行、诊断过程安全无创伤易于为病人所接受、诊断标准统一受个人主观因素影响较小、诊断结果特异性和灵敏性高、易于进行大量筛查遴选等优点。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及疾病生物标志物用途领域，特别涉及到肝硬化生物标志物VWF和ADAMTS13及其在肝硬化诊断试剂中的用途。
技术介绍
肝硬化是慢性进行性肝病，由一种或多种病因长期或反复作用形成的弥漫性肝损害。在我国大多数为肝炎后肝硬化，少部分为酒精性肝硬化和血吸虫性肝硬化。病理组织学上有广泛的肝细胞坏死、残存肝细胞结节性再生、结缔组织增生与纤维隔形成，导致肝小叶结构破坏和假小叶形成，肝脏逐渐变形、变硬而发展为肝硬化。早期由于肝脏代偿功能较强可无明显症状，后期则以肝功能损害和门脉高压为主要表现，并有多系统受累，晚期常出现上消化道出血、肝性脑病、继发感染、脾功能亢进、腹水、癌变等并发症。在我国肝硬化的病死率仅次于恶性肿瘤，每年大约每10万人口即有154人死于肝硬化。在世界范围内，肝硬化也越来越成为临床常见的疾病之一，据统计肝硬化已成为世界三大致命病因之一。如何能够方便、快捷、及时、准确的检测诊断肝硬化，并对患者肝硬化治疗效果跟踪监控，已经成为肝硬化卫生领域迫切需要解决的问题。最早的肝硬化检测方法使用的是肝穿刺活检法，这种方法的诊断结果是肝硬化诊断行业内公认的较为准确的肝硬化诊断法。然而，这种方法易存在很大的局限性。首先，该方法为创伤性，不易被病人所接受；其次，操作时有并发症发生的可能，不宜进行频繁多次活检；第三，肝穿刺活检法穿刺样本小，只占到肝脏质量的1/50000，存在较大的取样误差。目前，我国诊断肝硬化应用较多的是B超。但是B超只是看到肝脏的形态，和病理并不直接相关，不能准确对肝硬化进行分析，无法判断肝硬化病情进展，并且对仪器及操作人员有较高的要求。CT和核磁检测方法对肝硬化的诊断很有帮助，但是此设备很昂贵，常规开展很困难，不适合中国国情。FibroScan技术已在中国起步，但多种因素影响FibroScan的准确性，如腹水，肝脏炎症，肥胖，脂肪肝等。相当一部分患者无法进行FibroScan的检查。由此本领域急需成本低廉、快速、简便、并且侵入性极小易于为病人接受的肝硬化诊断方法。VWF为英文von Willebrand factor的首字母缩写，中文可译为血管性血友病因子，www.uniprot.org网站登录号为P04275的条目对其氨基酸序列进行了披露。VWF是一种大分子蛋白质多聚体，主要用于VWD即血管性血友病的诊断。同时，公开号CN102614513A的中国专利“抗血管性血友病因子A3区双功能性单克隆抗体的应用”还公开了VWF在制备抗血栓药物中的用途。ADAMTS13为英文Adisintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs 13的缩写简称。其他替代名称还有von Willebrand factor-cleaving protease，中文可译为血管性血友病因子分解酶。www.uniprot.org网站登录号为Q76LX8的条目对其氨基酸序列进行了披露，共有3个亚基序列。
技术实现思路
为了克服现有技术肝硬化诊断存在的种种缺点，本专利技术提供两种肝硬化生物标志物VWF和ADAMTS13。所述VWF由氨基酸序列在NCBI数据库中登录号为GI 317373549的蛋白质组成，所述ADAMTS13由氨基酸序列在NCBI数据库中登录号为GI 74749836的蛋白质组成。本专利技术的专利技术人发现，出现明显的肝硬化疾病症状之前的很长时间内就能鉴别出血清或其他体液中相关的生物标志物VWF和ADAMTS13。并且在肝硬化患病与否的人体血清中VWF或ADAMTS13的含量差异很大，由此可以考虑将人体血清中的生物标志物VWF和ADAMTS13的含量用作肝硬化诊断工具，并依据这些诊断工具的诊断结果实现对肝硬化患者的个体化用药。基于上述发现，本专利技术提供了生物标志物VWF和/或ADAMTS13在制备诊断肝硬化诊断试剂中的用途。本文所用术语通常定义如下：VWF：由氨基酸序列在NCBI数据库中登录号为GI 317373549的蛋白质组成的蛋白质；ADAMTS13：由氨基酸序列在NCBI数据库中登录号为GI 74749836的蛋白质组成的蛋白质；第一参考值：未发展成肝硬化的慢性肝病患者被试者血清中VWF的含量；第二参考值：未发展成肝硬化的慢性肝病患者被试者血清中ADAMTS13的含量；第三参考值：未发展成肝硬化的慢性肝病患者被试者血清中VWF含量与ADAMTS13含量的比值。所有本文未进行定义的术语皆与本领域普通技术人员通常所理解的含义相同。具体的，方案之一：所述诊断试剂通过检测被试者血清中VWF的含量，并与第一参考值相比较来诊断肝硬化；方案之二：所述诊断试剂通过检测被试者血清中ADAMTS13的含量，并与第二参考值相比较来诊断肝硬化；方案之三：所述诊断试剂通过同时检测被试者血清中VWF和ADAMTS13的含量，并用两者的比值与第三参考值相比较来诊断肝硬化。在更为特定的方案中，可以使用电泳法，免疫化学法例如放射免疫测定测定、免疫荧光测定、酶联免疫吸附测定、化学发光、电化学发光、胶体金（免疫层析测量）、免疫比浊测定，特异性抗体结合法例如直接竞争法、间接竞争法、ELISA法、RIA法、流式细胞仪法、免疫层析法等常用检测方法来检测被试者血清中VWF和/或ADAMTS13的含量。优选的，通过胶体金免疫层析法来检测被试者血清中VWF和/或ADAMTS13的含量。进一步的，本文所述被试者血清可以用被试者全血、血浆、血细胞、腹水、淋巴液、唾液、痰液、汗液、尿液、粘液、间质液或者组织活检替代。本专利技术还提供了生物标志物VWF和/或ADAMTS13及其特异性结合物在制备用于通过检测被试者血清中VWF和/或ADAMTS13的含量水平而对慢性肝病患者进行肝硬化筛查的试剂盒中的用途。本专利技术还提供了生物标志物VWF和/或ADAMTS13及其特异性结合物在制备用于通过检测被试者血清中VWF和/或ADAMTS13的含量水平而对肝硬化患者的预后进行判断的试剂盒中的用途。本专利技术还提供了生物标志物VWF和/或ADAMTS13及其特异性结合物在制备用于通过检测被试者血清中VWF和/或ADAMTS13的含量水平而判断对肝硬化患者的手术或药物治疗是否有效和/ 或决定何时停止治疗的试剂盒中的用途。为了便于应用，本专利技术还提供一种用于诊断肝硬化的诊断试剂盒，该试剂盒包括底板、样品垫、金标垫、NC膜和吸收垫；所述底板上设置有顺次相互搭接的样品垫、金标垫、NC膜和吸收垫，所述金标垫涂有包含抗体一的胶体金溶液，所述NC膜上设置有检测线和质控线，所述检测线和质控线处分别涂有抗体二和抗体三。所述抗体一、抗体二和抗体三都为VWF的特异性结合抗体或者抗体一、抗体二和抗体三都为ADAMTS13的特异性抗体。所述抗体一为单克隆抗体。进一步的，所述诊断试剂盒中抗体一、抗体二和抗体三为VWF或ADAMTS13的特异性抗体片段。使用本专利技术生物标志物VWF和ADAMTS13对肝硬本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.肝硬化生物标志物，特征在于：为VWF和ADAMTS13中的任意一个，所述VWF由氨基酸序列在NCBI数据库中登录号为GI 317373549的蛋白质组成；所述ADAMTS13由氨基酸序列在NCBI数据库中登录号为GI 74749836的蛋白质组成。
2.权利要求1所述生物标志物和所述生物标志物的特异性结合物在制备诊断肝硬化的诊断试剂中的用途，所述诊断试剂通过检测被试者血清中的VWF和/或ADAMTS13的含量，并与正常水平相比较来诊断肝硬化。
3.权利要求1所述的生物标志物或其特异性结合物在制备用于通过检测被试者血清中VWF和/或ADAMTS13的含量水平而对慢性肝病患者进行肝硬化筛查的试剂盒中的用途。
4.权利要求1所述的生物标志物或其特异性结合物在制备用于通过检测被试者血清中VWF和/或ADAMTS13的含量水平而对肝硬化患者的预后进行判断的试剂盒中的用途。
5.权利要求1所述的生物标志物或其特异性结合物在制备用于通过检测被试者血清中VWF和/或ADAMTS13的含量水平而判断对肝硬化患者的手术或药物治疗是否有效和/ 或决定何时停止治疗的试剂盒中的用途。
6.根据权利要求2~5任一权利...
【专利技术属性】
技术研发人员：高平，
申请(专利权)人：高平，
类型：发明
国别省市：
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