一种HPLC法测定青蒿素含量和有关物质方法技术

本发明专利技术涉及一种新的HPLC法测定青蒿素含量及有关物质的方法，流动相选用乙腈-水进行梯度洗脱，检测器为紫外检测器，检测波长为216nm。该方法准确可靠，分离效果好，专属性强，灵敏度高，可用于青蒿素原料药中青蒿素含量和有关物质的测定和质量控制。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种HPLC法测定青蒿素含量及有关物质的方法，属于药物分析领域。 
技术介绍
青蒿素是由菊科植物黄花蒿(又名青蒿)所提炼出来的倍半萜内酯化合物，是治疗恶性疟原虫所引发的疟疾的特效药。目前已有很多文献报道青蒿中青蒿素的含量测定方法，对于青蒿素原料药中青蒿素含量及有关物质的的测定还鲜有研究，《中国药典》2010版青蒿素的含量和相关物质的测定是高效液相色谱法，流动相选用乙腈-水(6:4)等度洗脱，等度洗脱不能完全分离青蒿素原料中的有关物质，对于青蒿素有关物质的检测具有一定的局限性，本专利技术采用梯度洗脱，建立一种新的青蒿素原料药中青蒿素含量和有关物质的高效液相色谱法，能更准确、高效地测定青蒿素中有关物质的含量，对于青蒿素原料药的检测和质量控制具有重要的意义。 
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种更准确、高效的测定青蒿素含量和有关物质的HPLC方法，用于青蒿素原料药的质量控制。本专利技术提供了一种HPLC法测定青蒿素有关物质的方法，其选用十八烷基键合硅胶色谱柱，以乙腈-水为流动相进行梯度洗脱，检测波长为216nm。在本专利技术的一些实施方案中，所述十八烷基键合硅胶色谱填料颗粒度为3-5μm，优选4.6μm。在本专利技术的一些实施方案中，色谱柱的长度为150mm-250mm，选用150mm色谱柱，流速为0.8ml/min, 选用250mm色谱柱，流速为1.0ml/min。在本专利技术的一些实施方案中，所述乙腈-水梯度洗脱的体积比为60%：40%(0min), 60%：40%(20min), 100%：0%(35min), 60%：40%(45min), 60%：40%(55min)。在本专利技术的一些实施方案中，检测波长优选216nm。本专利技术提供的一种HPLC法测定青蒿素有关物质的方法，其包括以下步骤：取青蒿素原料药适量，用乙腈溶解并定容，配制成青蒿素浓度为5mg/ml的供试品溶液。取青蒿素标准品适量，用乙腈溶解并定容，配制成青蒿素浓度为5mg/ml标准品溶液。分别取供试品溶液和标准品溶液，注入液相色谱仪，按照本专利技术色谱条件进行测定，所得峰面积按外标法计算供试品中青蒿素的含量。色谱条件为：色谱柱填料选用十八烷基键合硅胶，以乙腈-水为流动相按梯度洗脱，其中乙腈和水的体积比为60%：40%(0min), 60%：40%(20min), 100%：0%(35min), 60%：40%(45min), 60%：40%(55min),流速为0.8ml/min~1.0ml/min,检测波长为216nm，进样体积为20μl。取上述青蒿素标准品溶液1ml置于200ml容量瓶，用乙腈稀释至定容，配制成青蒿素浓度为0.025mg/ml对照品溶液。分别取供试品溶液和对照品溶液，注入液相色谱仪，按照本专利技术色谱条件进行测定，供试品如有杂质峰，杂质含量按如下公式计算：有关物质含量= (A1*1*10* W2)/( A2*10*200* W1)其中，A1为待测供试品溶液中杂质峰的峰面积；A2为对照品溶液中青蒿素峰的峰面积；W1为配制青蒿素供试品溶液时称量的重量；W2为配制青蒿素标准品溶液时称量的重量。色谱条件为：色谱柱填料选用十八烷基键合硅胶，以乙腈-水为流动相按梯度洗脱，其中乙腈和水的体积比为60%：40%(0min), 60%：40%(20min), 100%：0%(35min), 60%：40%(45min), 60%：40%(55min),流速为0.8ml/min~1.0ml/min,检测波长为216nm, 进样体积为20μl。分别取供试品溶液和标准品溶液，注入液相色谱仪，按照本专利技术色谱条件进行测定，所得供试品主峰和标准品主峰的峰面积按照外标法计算青蒿素原料药中青蒿素的含量。色谱条件为：色谱柱填料选用十八烷基键合硅胶，以乙腈-水为流动相按梯度洗脱，其中乙腈和水的体积比为60%：40%(0min), 60%：40%(20min), 100%：0%(35min), 60%：40%(45min), 60%：40%(55min),流速为0.8ml/min~1.0ml/min,检测波长为216nm, 进样体积为20μl。 附图说明图1为诺华青蒿素色谱图。图2为青蒿素标准品色谱图。图3为青蒿素对照品色谱图。具体实施方案实施例1实验材料、仪器与色谱条件青蒿素供试品，购自诺华制药，青蒿素含量为99.0%,单杂为0.43%，总杂为0.6%，0.25%与0.5%质检的杂质个数为1个。青蒿素标准品，购自北京药品生物制品检定所，含量为98.8%。高效液相色谱仪选用美国Agilent1260型号仪器，检测器为DAD检测器，色谱柱为thermo C18，4.6mm×250mm，5μm，检测波长为216nm，进样量：20μl(自动进样)，流速：1ml/min，流动相：乙腈-水梯度洗脱，其梯度比如表1。表1.乙腈-水梯度比实验步骤取诺华青蒿素适量，用乙腈溶解并定容，配制成青蒿素浓度为5mg/ml的供试品溶液，供试品溶液同法重复配制3次。取青蒿素标准品适量，用乙腈溶解并定容，配制成青蒿素浓度为5mg/ml标准品溶液，标准品溶液同法重复配制3次。分别取供试品溶液和标准品溶液，注入液相色谱仪，按照本专利技术色谱条件进行测定并记录色谱图，其中同一标准品重复进样5次，供试品溶液和标准品溶液所得峰面积按外标法计算供试品中青蒿素的含量。图1为供试品青蒿素色谱图，青蒿素主峰保留时间为15.562min，诺华青蒿素样品中分离出两种杂质，保留时间分别为3.487min和9.714min，两杂质峰与主峰分离度分别为4.46和1.6，分离效果良好(均大于1.5)，符合2010版中国药典的标准。标准品溶液重复进样5次所得峰面积RSD值为0.12%，表明在本专利技术公开的青蒿素含量检测方法进行含量测定重复性好，精密度高。供试品和标准品3个样品峰面积平均值分别为2174.78859和2181.36652,按外标法计算诺华青蒿素含量为99.1%，表明本专利技术公开的青蒿素含量检测方法进行含量测定结果准确、可靠，可用于青蒿素原料药中青蒿素含量的测定和质量控制。实施例2采用与实施例1中相似的实验材料，实验仪器和实验步骤，其中配制对照品溶液的方法为：取实施例1中所述青蒿素标准品溶液1ml置于200ml容量瓶，用乙腈稀释至定容，配制成青蒿素浓度为0.025mg/ml对照品溶液。分别取实施例1中所述供试品溶液和对照品溶液，注入液相色谱仪，记录供试品溶液图谱中杂质的峰面积，按如下公式进行杂质含量的计算：有关物质含量= (A1*1*10* W2)/( A2*10*200* W1)其中，A1为待测供试品溶液中杂质峰的峰面积；A2为对照品溶液中青蒿素峰的峰面积；W1为配制青蒿素供试品溶液时称量的重量；W2为配制青蒿素标准品溶液时称量的重量。图3为本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种HPLC法测定青蒿素含量及有关物质的方法，其特征在于选用十八烷基键合硅胶色谱柱，以乙腈-水为流动相进行梯度洗脱，检测器为紫外检测器，检测波长为216nm。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述十八烷基键合硅胶色谱柱填料的颗粒粒径为3-5μm。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，选用柱长为150mm色谱柱时，流速为0.8ml/min， 选择柱长为250mm色谱...

【专利技术属性】
技术研发人员：彭学东，张梅，赵金召，申造，
申请(专利权)人：江苏斯威森生物医药工程研究中心有限公司，
类型：发明
国别省市：