本发明专利技术涉及一种检测丙型肝炎病毒抗体的微流控纸基芯片及其制备方法。根据本发明专利技术的微流控纸基芯片包括多个微型检测通道，各通道分别包被有HCV核心抗原、HCV NS5抗原、HCV NS4抗原、HCVNS3抗原及其组合。多通道的检测能力使得微流控纸基芯片可以同时进行多个免疫项目的检测。通过在微流控纸基芯片上集成微型化的筛查和确诊测试，大幅简化复杂的HCV诊断过程，从而大幅提高诊断效率。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术涉及。根据本专利技术的微流控纸基芯片包括多个微型检测通道，各通道分别包被有HCV核心抗原、HCV?NS5抗原、HCV?NS4抗原、HCVNS3抗原及其组合。多通道的检测能力使得微流控纸基芯片可以同时进行多个免疫项目的检测。通过在微流控纸基芯片上集成微型化的筛查和确诊测试，大幅简化复杂的HCV诊断过程，从而大幅提高诊断效率。【专利说明】
本专利技术涉及疾病的诊断领域，具体而言涉及一种用于检测丙型肝炎病毒抗体的微流控纸基芯片、及其制备方法和检测试剂盒样本。
技术介绍
丙型肝炎是一种由丙型肝炎病毒(HCV)引起的，在全球范围传播的传染性疾病，具有较大的危害。HCV在美国每年造成的死亡人数超过艾滋病，同时也是造成肝硬化、肝癌和需要肝移植的主要原因。WHO估计全球至少有1.5亿人感染了 HCV，而且在未来的十年中，HCV对全球健康的危害还会持续性增长。我国累积的HCV患者数量已经超过了 4300万人。造成HCV流行的一个主要原因是HCV的诊断率较低。大部分的丙型肝炎患者并不知道自己的感染情况。等发现HCV感染时，患者往往已经到了疾病晚期。晚期症状不仅难以治愈和逆转，而且会耗费大量的医疗和社会资源。美国疾控中心推荐1946年至1965年出生的人(婴儿潮，大致7600万人)都要进行HCV诊断。因为HCV具有传播广泛和诊断率低等特点，该疾病被称为“寂静的流行病(the silent pandemic)” 。造成HCV诊断率低的主要原因之一是目前针对HCV的检测和诊断方法具有一些不足。首先，HCV的诊断流程是分步进行的。第一步得到的筛查结果需要进行第二步的确诊检测。筛查诊断方法主要是酶联免疫吸附检测(ELISA)，虽然具有较高的灵敏度，但是其特异性较低，容易产生假阳性的结果。因而需要使用特异性更好的方法来进行诊断结果的确认。确诊方法之一是重组免疫印迹法(RIBA)。它采用独立的HCV抗原进行检测，从而可以确保检测结果的较高特异性。因为分步进行的诊断的流程较为复杂，其会限制诊断效率的提升。有数据表明，我国的丙肝的漏诊率高达52%。即使在英国和美国等发达国家，分别只有25%至50%的患者可以拿到确诊的结果。一半以上的患者在获得筛查的结果之后，没有得到确诊的结果。因而，这些患者是否真的感染了 HCV也无从得知。不知情的HCV感染患者会不可避免的加速该疾病的传播。此外，HCV诊断技术本身(如ELISA和RIBA检测)的费用昂贵、检测时间较长(6-7小时)以及样本消耗量较大(20微升以上)。这些都限制了在大规模人群中进行HCV诊断的可行性，影响了 HCV诊断的覆盖率，最终导致HCV的广泛传播和严重危害。微流控纸基芯片是近年发展的一种新技术，其特征是采用具有一定几何尺寸和微结构的特殊纸基，使液体可以在纸上依赖毛细管作用力在一定边界内按照一定的方向流动。纸基是指多孔亲水的层状材料。纸基所具有的毛细管作用力可以取代动力源和驱动系统，如电源和水泵。此外，纸基芯片尺寸小、比表面积大和价格相对便宜，因此具有样本消耗少、反应速度更快和可以进行多元反应(或检测)的潜力和优势。微流控纸基芯片具有构建集成化的、廉价、快速的临床诊断平台的巨大潜力。
技术实现思路
根据本专利技术的一方面，提供一种检测丙型肝炎病毒抗体的微流控纸基芯片，其包括两个以上的检测通道，所述检测通道各包括一个上样区和一个检测区；其特征在于:所述各检测区分别包被有选自如下的一种或多种:HCV核心抗原、HCV NS5抗原、HCV NS4 抗原、HCV NS3 抗原。在一些实施方式中，各检测通道可以共享、也可以不共享同一上样区。在优选实施方式中，各检测通道共享同一上样区，这使得仅需一次滴加就可以实现多通道的同时点样操作。在一些实施方式中，检测区到上样区的距离可以相等也可以不等。在优选实施方式中，各检测通道的检测区到上样区的距离相等。可以理解，一经上样，样本可以同时到达检测区，便于后续操作的时间监控，也利于缩短实验流程。在微流控纸基芯片上，所述检测区以外的区域包被有选自如下的惰性成分:BSA、血蓝蛋白、脱脂奶粉、酪蛋白、卵清蛋白。在一些实施方式中，在纸基上划分出两个以上的检测通道；再在检测通道上划分出上样区和检测区；每个检测区与上样区物理上通过纸基通道相连。液体可以从纸基的上样区沿着纸基通道流到纸基检测区。在一些实施方式中，本专利技术的微流控纸基芯片适用于化学发光或显色免疫检测。在一些实施方式中，包括2个至20个检测通道，优选3-18、3-12、5-12、5-10个检测通道；最优选7或8个检测通道。此处所用术语“纸基”是指多孔亲水的层状材料，其可以允许液体在其上的流动；该材料具有一定的几何形状，从而可以控制液体的流动方向和流动的边界；该材料的部分区域可以吸附或固定抗原或抗体等蛋白质。当各检测通道共享同一上样区且各检测通道的检测区到上样区的距离相等时，本专利技术的纸基可以体现为任何适当的形状，包括但不限于图1A至图1D所示的形状。虽然本专利技术的具体实例基于图1A所示的具体形状和尺寸，但是技术人员可以理解，在此基础上所进行的变化也涵盖在本专利技术的范围内。在一些实施方式中，所述纸基为亲水性多孔层状材料；纸基选自聚偏二氟乙烯、聚碳酸酯、甲基乙基纤维素、硝酸纤维素纸；其中优选甲基乙基纤维素、硝酸纤维素纸。在优选实施方式中，纸基为硝酸纤维素纸；硝酸纤维素是一种硝酸化的纤维素，在纤维素的骨架上具有硝酸基团，这些硝酸基团可以与蛋白质产生非共价的作用力，从而将蛋白质稳定的吸附在硝酸纤维素上。在一些具体的实施方式中，纸基为Amersham Protran NC硝酸纤维素纸。可用的硝酸纤维素纸的孔径是0.45微米、0.2微米或0.1微米。在一些实施方式中，纸基为AmershamProtran NC0.45硝酸纤维素纸。在一些实施方式中，检测丙型肝炎病毒抗体的微流控纸基芯片还可以包括空白检测通道。空白检测通道的检测区上包被有惰性成分，如BSA、血蓝蛋白、脱脂奶粉、酪蛋白、卵清蛋白。在一些实施方式中，检测丙型肝炎病毒抗体的微流控纸基芯片还可以包括阳性对照检测通道。阳性对照检测通道的检测区上包被有抗人IgG的抗体。在一些实施方式中，检测丙型肝炎病毒抗体的微流控纸基芯片还可以包括阴性对照检测通道。在一些实施方式中，所述抗原可以是天然抗原或重组抗原。在一些实施方式中，所述检测区为5-6平方毫米。在一些实施方式中，微流控纸基芯片上，除检测区以外的其它区域包被有惰性蛋白；优选牛血清白蛋白。在一些实施方式中，检测通道长度在l_15mm之间，优选7_8mm ;宽在l_4mm之间，优选2mm。在一个优选的实施方式中，检测丙型肝炎病毒抗体的微流控纸基芯片包括8个检测通道，其中所述5个检测通道的检测区分别包被有:HCV核心抗原、HCV NS5抗原、HCV NS4抗原、HCV NS3抗原和HCV抗原的组合，所述HCV抗原的组合是指HCV核心抗原、HCV NS5抗原、HCV NS4抗原和HCV NS3抗原的组合；其中I个检测通道的检测区包被有抗人IgG的抗体作为阳性对照检测通道；其中I个检测通道的检测区包被有BSA作为空白检测通道；其中I个检测通道的检测区包被有HCV抗原的组合作为阴性对照检测通道；所述纸基是孔径为0.4本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种检测丙型肝炎病毒抗体的微流控纸基芯片，其包括：两个以上的检测通道，所述检测通道各包括一个上样区和一个检测区；所述各检测区分别包被有选自如下的一种或多种：HCV核心抗原、HCV NS5抗原、HCV NS4抗原、HCV NS3抗原；所述纸基为亲水性多孔层状材料。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：郑直，慕轩，
申请(专利权)人：中国医学科学院基础医学研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11
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