【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物
，尤其是1，3-二羟基丙酮高产菌株及其构建方法。
技术介绍
目前，迅速升温的生物柴油投资热使生产过程中副产的甘油出现过剩，每生产10g生物柴油就会产生1g甘油，因此为这些甘油寻找新的利用途径已引起全球的普遍关注，而利用甘油发酵生产1，3-二羟基丙酮则是其中的一条有效途径。1，3-二羟基丙酮（DHA）是一种天然存在的酮糖，具有生物可降解性，且对人体和环境无毒害。DHA具有极强的防晒性，利用这一特性，国外已经成功开发出了多种保湿防晒化妆产品；在医学上已经证明DHA可以用来治疗白斑和白癜风，且具有抗肥胖功效，还可以直接作为一种抗病毒试剂，DHA的相应的衍生物还具有抗艾滋病病毒的作用；而且，DHA的衍生物也是有机合成化学中一类非常重要的中间体，其用途极其广泛。利用甘油发酵二羟基丙酮的过程中，优良的菌种是发酵成功的前提。相对于传统的菌种选育方法，基因工程手段具有目标明确、途径清晰的优点，经过基因改造的高产菌株将更适于工业化的生产过程，可降低生产成本，继而实现经济效益的大幅度提升。目前国内针对高产二羟基丙酮生产菌株的研究多集中于菌种选育，而利用基因工程手段选育DHA高产菌株的研究还很少，经查新发现，仅华东理工大学的魏东芝等人用重组基因工程质粒pET－gdh和pET－ndh转化大肠杆菌，构建得到一株工程菌，提高了二羟基丙酮的转化率。
技术实现思路
本专利技术所要解决...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.1,3-二羟基丙酮高产菌株GOX205，其特征在于：是以氧化葡萄糖酸杆
菌ATCC621H作为宿主，选择质粒pBBR1MCS-2作为载体，通过将编码甘油
脱氢酶的sldAB基因转化进入宿主并进行表达的一种菌株。
2.权利要求1所述的1，3-二羟基丙酮高产菌株的构建方法，其特征在
于：具体步骤如下：
（1）制备氧化葡萄糖酸杆菌染色体；
（2）扩增sldAB基因；
（3）pBBR1MCS-2质粒与sldAB基因的消化；
（4）DNA片段的纯化回收；
（5）载体pBBR1MCS-2片段和sldAB基因片段的连接；
（6）质粒的富集与提取；
（7）电转化法构建重组菌株GOX205；
（8）挑选转化子。
3.根据权利要求2所述的1，3-二羟基丙酮高产菌株的构建方法，其特
征在于：具体步骤如下：
（1）制备氧化葡萄糖酸杆菌染色体：将氧化葡萄糖酸杆菌接种到含有5ml
甘露醇液体培养基的试管中，30℃条件下振荡培养10-12小时；然后将培养液
转移入1.5ml离心管中，12000rpm离心30-60秒后，弃上清液，沉淀用0.5ml
无菌水重悬，然后12000rpm离心30-60秒，收集菌体；加190μl TE悬浮沉淀，
并加10μl10%SDS，1μl20mg/ml蛋白酶K，混匀，37℃保温1h；加30μl5mol/L
NaCl，混匀；加30μl CTAB/NaCl溶液，混匀，65℃保温20min；加入300μl
体积比25：24：1的酚/氯仿/异戊醇抽提，5000rpm离心10min，将上清液移
至干净离心管；加入300μl体积比24：1的氯仿/异戊醇抽提，取上清液移至
干净管中；加300μl异丙醇，颠倒混合，室温下静止10min，沉淀DNA；5000rpm
离心10min，沉淀DNA，加入500μl70%乙醇，5000rpm离心10min，弃乙醇，
自然风干；溶解于20μlTE，于-20℃保存备用；
（2）扩增sldAB基因：以氧化葡萄糖酸杆菌染色体作为模板，根据氧化
葡萄糖酸杆菌染色体中sldAB基因序列设计引物，上引物为sldab-fw：
catggatccaacgccagtttgctctg，下引物为sldab-re：catgaattccacctccgaccgtcat分别在上
下引物两端添加HindⅢ、EcoRⅠ限制性内切酶酶切位点，以PCR方法扩增
sldAB基因，PCR体系为50μl：上下引物均为1μl,200M的dNTP4μl,缓冲液5μl，
步骤（1）所述氧化葡萄糖酸杆菌染色体模板为0.5μl，双蒸水38.25μl，聚合酶
\t0.25μl；PCR扩增条件为：94℃预变性4min；94℃变性30sec；55℃退火30sec，
72℃延伸3min，得到PCR扩增产物sldAB基因；
（3）pBBR1MCS-2质粒与sldAB基因的消化：...
【专利技术属性】
技术研发人员：许晓菁，何雨晴，夏博勋，赵琼，
申请(专利权)人：天津实发中科百奥工业生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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