双功能肽、所述双功能肽与核酸分子形成的复合物以及治疗肿瘤的药物组合物制造技术

本发明专利技术涉及一种双功能肽，所述的双功能肽包含癌细胞凋亡肽和穿膜肽。本发明专利技术还涉及一种由所述双功能肽与核酸分子形成的复合物及其在治疗肿瘤中的用途。本发明专利技术还涉及一种用于对抗肿瘤和肿瘤多药耐药现象的药物组合物，包含所述的双功能肽、肿瘤治疗基因和化学治疗药物，以及其在治疗肿瘤中的用途。本发明专利技术所涉及的双功能肽能够诱导癌细胞凋亡和促进肽及其复合物跨越细胞膜。而且本发明专利技术所述的药物组合物将双功能肽、肿瘤治疗基因和化疗治疗药物结合起来，不但可以降低化疗药物的给药量从而明显减少其对生物体的毒副作用，同时可以更好地对肿瘤细胞的生长进行抑制，有效对抗肿瘤的多药耐药现象。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物医药领域，更具体而言，本专利技术涉及一种双功能肽，所述双功能肽能够诱导癌细胞凋亡和促进肽及其复合物跨越细胞膜。同时，本专利技术还涉及一种由所述双功能肽与核酸分子形成的复合物、包含所述复合物和抗癌的化学治疗药物的组合物，以及他们的用途。 
技术介绍
恶性肿瘤一直以来都威胁着人类的生命。据世界卫生组织报道，癌症的发病率逐年升高，并且呈现年轻化趋势。但是，在临床肿瘤化疗过程中，尽管新的化疗药物不断出现，化疗方案不断改进，仍有超过90%的癌症患者死于不同程度的肿瘤耐药；另一方面，临床上在对恶性肿瘤病人进行化学治疗时，给予的药物剂量一般为“可耐受的最大剂量”，而绝大部分抗肿瘤药物缺乏对肿瘤细胞的选择性，在杀伤肿瘤细胞的同时，也产生严重的全身不良反应。因此，如何在保证化疗药物有效杀灭肿瘤细胞的同时，通过各种方式，减少化疗药物的用量，减少毒副反应，以保护机体的正常细胞、组织和器官免于细胞毒药物的损害，是目前医学科研工作者们研究的重要课题之一。 同时，肿瘤组织十分复杂，包含有各群、各期和各型的肿瘤细胞。例如，肿瘤由增殖细胞群（干细胞），非增殖细胞群（G0期细胞），无增殖能力细胞群组成；此外还有化疗后产生的耐药细胞群。其中，增殖细胞群（干细胞）又由G1期（DNA合成前期）、S期（DNA合成期）、G2期（细胞分裂前期）和M期（细胞分裂期）构成。而肿瘤化疗药物的作用机制大多是单一的，所以很难用一种药物来抑制和杀灭肿瘤。 美国国立癌症研究所已经提出，癌症的治疗可以借鉴艾滋病，单独使用一种药物效果很差，而联合使用时作用极有可能得到增强，因此对于癌症的治疗，也可采取“鸡尾酒”疗法。在已公开的文献中，Thierry Conroy等研究了342位胰脏癌初级阶段的患者并发现，用奥沙利铂（Oxaliplatin）、伊立替康（Irinotecan）、亚叶酸钙（Leucovorin）以及氟尿嘧啶（fluorouracil）四种 化疗药物联合用药与单一使用吉西他滨（Gemcitabine）相比，可以提高胰脏癌患者平均存活率高达6成（参见文献Conroy T,Desseigne F,Ychou M,et al.FOLFIRINOX versus gemcitabine for metastatic pancreatic cancer.The New England Journal of Medicine 2011,364:1817-1825）；Massague等人研究发现同时抑制了四个导致乳腺癌癌细胞转移至肺部的基因与一次只抑制一个基因相比可以更有效地阻止癌症转移（参见文献Gupta GP，Nguyen DX,Chiang AC,Bos PD,Kim JY，Nadal C,Gomis RR,Manova-Todorova K,MassaguéJ.Mediators of vascular remodelling co-opted for sequential steps in lung metastasis.Nature 2007,446:765-770）；van Vlerken等将可以诱导凋亡的神经酰胺与化疗药紫杉醇联用（参见文献van Vlerken LE,Duan Z,Little SR,Seiden M,Amiji MM.Augmentation of therapeutic efficacy in drug-resistant tumor models using ceramide coadministration in temporal-controlled polymer-blend nanoparticle delivery systems.The AAPS journal 2010,12:171-180）；Lee等将中药成分丹参酮引入阿霉素多药耐药细胞，可以增强耐药细胞对阿霉素的吞噬（参见文献Lee WYW，Cheung CCM,Liu KWK,Fung KP，Wong J,Lai PBS,Yeung JHK.Cytotoxic effects of tanshinones from salvia miltiorrhiza on doxorubicin-resistant human liver cancer cells.Journal ofnatural products 2010,73:854-859）。这些“鸡尾酒”疗法，联合两种及以上的药物治疗恶性肿瘤，凭借药物间的药效作用互为补充并增强，己在临床上体现出明显的效果。 但是，也有研究报道，全部由化学治疗药构成的“鸡尾酒”体系有增加副作用的危险，接受这种疗法的患者产生了更多样的副作用，包括：疼痛、末稍神经无知觉、没有食欲、腹泻与体重减轻等，这预示着今后癌症治疗的发展方向将从通过化学治疗药直接杀伤癌细胞到将化学药物、基因药物、分子生物学靶向药物、天然植物提取物等联合起来进行“鸡尾酒”疗法，来控制癌细胞的增殖和肿瘤的发展，甚至预防肿瘤的发生。 
技术实现思路
为解决现有技术中存在的技术问题，本专利技术人进行了广泛深入的研究，最终得到本专利技术。 本专利技术的一个目的是提供一种双功能肽，所述双功能肽是含有癌细胞凋亡肽和穿膜肽的重组多肽，其能够诱导癌细胞凋亡和促进肽及其复合物跨越 细胞膜，其中，带正电荷的穿膜肽部分不仅可以作为非病毒基因载体包裹治疗基因，而且还可以结合生物膜磷酸盐端基上的负电荷从而推动整个多肽及其复合物进入细胞质。在本专利技术的双功能肽中，所述癌细胞凋亡肽位于所述双功能肽的N端，所述穿膜肽位于所述双功能肽的C端。 本专利技术的另一个目的是提供所述双功能肽作为非病毒基因载体的用途。 本专利技术的另一个目的是提供由所述双功能肽与核酸分子形成的复合物。 本专利技术的又一个目的是提供所述双功能肽与核酸分子形成的复合物的用途。 本专利技术的还一个目的是提供一种治疗肿瘤的药物组合物，该药物组合物不但可以降低化疗药物的给药剂量从而明显减少其对生物体的毒副作用，同时可以更好地对肿瘤细胞的生长进行抑制，而且根据“耐药即凋亡抑制”的理论，还更为有效地对抗肿瘤的多药耐药。 在对肿瘤发生机制的研究中，发现了一些在细胞凋亡的途径中有着极其重要作用的蛋白。Verhagen AM和Du C等发现了Smac蛋白(second mitochondrial derived activator of caspase)。当机体接受凋亡刺激后，Smac蛋白从线粒体膜间腔释放进入细胞质，通过与多种IAP（凋亡抑制蛋白）相互作用，去除凋亡抑制蛋白IAP介导的对caspase（含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶）启动酶和效应酶的抑制。成熟Smac蛋白只在凋亡受到异常阻滞的肿瘤细胞内行使其促凋亡作用而并不引起健康细胞的凋亡。同时，Smac氨基末端的四肽（Ala-Val-Pro-IIe,AVPI）能发挥大部分结合并且抑制IAPs的功能活性。可以设想，运用从Smac蛋白衍生的、含AVPI的多肽分子可以中和减弱IAPs对于caspases的抑制作用，达到与Smac相似的效果，使肿瘤细胞对于凋亡变得敏感而更加容易被杀死。 ...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种双功能肽，其特征在于：所述的双功能肽包含癌细胞凋亡肽和穿
膜肽。
2.根据权利要求1所述的双功能肽，其特征在于：所述癌细胞凋亡肽为
smac蛋白的N端序列AVPI；所述穿膜肽为聚精氨酸Rn，其中n=5-12。
3.根据权利要求1或2所述的双功能肽，其特征在于：所述双功能肽的
氨基酸序列为AVPIRRRRRRRR。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的双功能肽，其特征在于：所述双功
能肽为带有长烷基链的双功能肽，其中，所述带有长烷基链的双功能肽为在
所述双功能肽的肽链的C端上增加C12~C18的直链烷基链的双功能肽。
5.一种由根据权利要求1-4中任一项所述的双功能肽与核酸分子形成的
复合物。
6.根据权利要求5所述的复合物，其特征在于：所述核酸分子包括DNA、
反义寡核苷酸和RNA，优选地，所述核酸分子选自报告基因、肿瘤治疗基因
和小分子干扰RNA，更优选地，所述核酸分子为选自p53基因、肿瘤自杀基
因和血管生成抑制因子中的一种或多种。
7.权利要求5或6所述的复合物在制备治疗肿瘤的药物中的用途。
8.一种用于对抗肿瘤和肿瘤多药耐药现象的药物组合物，其特征在于：
包含权利要求1-3中任一项所述的双功能肽、肿瘤治疗基因和化学治疗药物。
9.根据权利要求8所述的用于对抗肿瘤和肿瘤多药耐药现象的药物组合
物，其特征在于，由以下步骤制备得到：
（a）合成如权...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄永焯，王慧媛，
申请(专利权)人：中国科学院上海药物研究所，
类型：发明
国别省市：