本发明专利技术公开一种TRAF1的抑制剂在肝缺血疾病中的应用，属于生物医药领域。本发明专利技术以TRAF1基因敲除小鼠和肝细胞特异性TRAF1转基因小鼠为实验对象，通过肝缺血再灌注损伤模型，结果表明与野生型C57小鼠对比，TRAF1基因敲除小鼠肝脏坏死明显被抑制，肝功能也明显好转，而肝细胞特异性TRAF1转基因小鼠的肝脏坏死则明显增加，且肝功能明显恶化。因此TRAF1基因具有恶化肝功能的作用，特别是TRAF1基因能够恶化肝缺血疾病的作用。针对TRAF1的上述功能，提供TRAF1作为肝缺血疾病治疗的药物靶标在研制肝缺血疾病药物中应用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于基因的功能与应用领域，特别涉及一种肿瘤坏子因子（TNF）受体相关因子1（TNF receptor-associated factor 1，TRAF1）作为药物靶标在筛选治疗肝缺血疾病药物中的应用, 以及TRAF1的抑制剂在制备治疗肝缺血疾病药物中的应用。
技术介绍
缺血-再灌注损伤（ischemia/reperfusion injury，I/R）是现今研究的热点问题之一，是肝脏移植、肝脏瘤切除术以及失血性休克等疾病和手术所共同经历的一个病理过程，其机制相当复杂，多种因素参与其中。现在的理论研究和临床实践都证实，在血液供应阻断30min以上就会引起各细胞器超微结构的改变和功能障碍，导致细胞不可逆的损伤乃至死亡，及时恢复血液供应被视为挽救这部分组织的重要措施。缺血再灌注损伤是指组织缺血缺氧达到一定的时间和程度引起细胞发生病理改变，在恢复血液供应后不一定使病变的细胞恢复功能，反而在一定条件下进一步加重的现象。导致缺血再灌注损伤的原因很多，确切的发病机制仍不十分清楚。目前，对于肝脏缺血再灌注损伤发生机制的研究己成为移植界关注的热点。在肝脏，肝脏缺血再灌注后肝窦内皮细胞和枯否(Kupffer cells)细胞活化，释放出多种炎性因子如氧自由基、细胞因子等，引起中性粒细胞趋化，粘附聚集，变形穿过肝窦内皮并浸润至肝细胞之间，然后活化释放出多种效应介质，最终引起肝脏细胞的坏死和凋亡。众多文献资料表明缺血再灌注损伤可能与下列因素有关：1．氧自由基的生成；2．钙超载；3．细胞因子的参与；4．Kupffer细胞及中性粒细胞激活；5．内皮素(Endothelin，ET)和一氧化氮(NO)浓度的失衡。肝脏缺血过程中由于肝细胞内ATP迅速耗尽，导致乳酸酮体等的堆积，及线粒体氧化磷酸化功能低下，引发代谢性酸中毒，缺血过程中细胞缺氧使ATP含量下降，导致肝细胞内外Ca2+重新分布，即Ca2+内流，引起线粒体的损伤。再灌注过程中由于氧自由基的爆发性增多，中性粒细胞的聚集，kupffer细胞的激活，细胞凋亡及其他多种细胞因子的作用，使得肝细胞膜损伤，内皮细胞损伤及肝脏微循环障碍等导致肝脏功能代谢障碍及结构破坏。总之，肝脏缺血再灌注损伤是由各种机制相互影响，综合作用的结果，进一步了解及明确其作用机制，将对临床防治肝脏缺血再灌注损伤有着重要的意义。肿瘤坏子因子（TNF）受体相关因子家族（TNF receptor-associated factor，TRAF）是一类结构相似的衔接蛋白，作为细胞内信号分子在 TNFR超家族、Toll 样/白介素1受体（Toll/IL-1 receptor, TIR）超家族和 RIG样受体（RLR）家族上游信号传导中发挥重要作用。目前哺乳动物中 TRAF 家族共有7个成员，分别为 TRAF1-7。TRAF包含一个大约230氨基酸长的C末端特征性TRAF结构域，介导TRAF蛋白形成同源或异源二聚体或结合其他衔接分子及信号传导分子。该结构域可分为高度保守的近C端（TRAF-C）和差异较大的近N端（TRAF-N）两个亚结构域，这种差异决定TRAF在特定环境和细胞类型下结合不同的受体或信号活化物。除TRAF1以外，TRAF2-7还包含一个高度保守的N末端指环结构域（RING finger domain）。TRAF具有调控宿主防御、炎症、和自身免疫等重要生物学功能，并在细胞分化、增殖、凋亡发挥重要作用。TRAF1最早通过酵母双杂交筛选作为 TNFR2的信号传导分子被发现。尽管其他TRAF家族成员在不同组织细胞中广泛分布，TRAF1的mRNA仅能在脾、肺、睾丸等少数组织中检测到。但是研究表明，多种刺激如白介素1（IL-1）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、CD40 配体和EB病毒感染均可显著诱导TRAF1表达。体内和体外实验证明抗-CD3、抗CD40、脂多糖等刺激T细胞和 B 细胞表达TRAF1。
技术实现思路
为解决上述现有技术的缺陷和不足，本专利技术的首要目的在于提供TRAF1作为药物靶标在筛选治疗肝缺血疾病药物中的应用。本专利技术的另一目的在于提供一种TRAF1的抑制剂在制备治疗肝缺血疾病药物中的应用。一种治疗肝缺血疾病的药物，包含TRAF1。所述的TRAF1的抑制剂优选为TRAF1基因的siRNA、TRAF1基因的RNA干扰载体、TRAF1的抗体及其他能够抑制TRAF1表达的抑制剂中的一种。本专利技术的目的通过下述技术方案实现：本专利技术以TRAF1基因敲除小鼠和肝细胞特异性TRAF1转基因小鼠为实验对象，通过肝缺血再灌注损伤模型，结果表明与野生型C57小鼠对比，TRAF1基因敲除小鼠肝脏坏死面积明显被抑制，而肝细胞特异性TRAF1转基因小鼠的肝脏坏死面积则明显增加。这提示TRAF1基因具有恶化肝功能的作用，为TRAF1在研究防治肝缺血的新靶点和新策略中所发挥的作用提供了理论依据和临床基础。一种TRAF1在肝缺血疾病中的功能，主要体现在TRAF1具有恶化肝功能的作用，特别是TRAF1基因能够恶化肝缺血疾病的作用。针对TRAF1的上述功能，提供一种TRAF1作为药物靶标在筛选治疗肝缺血疾病的药物中应用。针对TRAF1的上述功能，提供一种TRAF1的抑制剂在制备治疗肝缺血疾病的药物中应用。所述的TRAF1的抑制剂优选为TRAF1基因的干扰载体，TRAF1的抗体及其他能够抑制TRAF1表达的抑制剂中的一种。本专利技术的研究成果表明，TRAF1- KO小鼠在肝脏缺血再灌注引起的损伤中，小鼠肝脏坏死面积明显减少，炎症反应明显改善，肝细胞凋亡也明显减少。证明TRAF1基因在肝缺血疾病模型中有着重要的恶化作用。抑制TRAF1表达可以改善肝组织缺血/再灌注损伤，且可能与肝细胞凋亡密切相关。本专利技术相对于现有技术具有如下的优点及效果：1.本专利技术发现TRAF1基因的新功能，即TRAF1基因能够恶化肝缺血疾病的作用。2. TRAF1在恶化肝缺血疾病中的作用，为研制肝缺血疾病的药物提供靶标。 附图说明图1是肝细胞特异性TRAF1转基因小鼠的构建及鉴定结果图A为TRAF1载体的构建图；B为肝细胞特异性TRAF1转基因小鼠的鉴定结果图。图2小鼠在不同时间点肝脏的坏死情况对比图。A为WT和TRAF1-KO小鼠在不同时间点肝脏HE染色图及坏死面积统计柱状图；B为NTG和TRAF1-TG小鼠在不同时间点肝脏HE染色图及坏死面积统计柱状图。图3小鼠在不同时间点血清中ALT及AST的含量统计比较图。A为WT和TRAF1-KO小鼠在不同时间点肝脏血清中ALT及AST的含量统计柱状图；B为NTG和TRAF1-TG小鼠在不同时间点肝脏血清中ALT及AST的含量统计柱状图。图4为WT，TRAF1-KO，NTG和TRAF1-TG小鼠缺血在再灌注12h时TUNEL细胞数的柱状统计图。A为WT和TRAF1-KO小鼠在再灌注12h时TUNEL免疫荧光柱状统计图；...
【技术保护点】
TRAF1作为药物靶标在筛选治疗肝缺血疾病的药物中的应用。
【技术特征摘要】
1.TRAF1作为药物靶标在筛选治疗肝缺血疾病的药物中的应用。
2.TRAF1的抑制剂在制备治疗肝缺血疾病的药物中的应用。
3.一种治疗肝缺血疾病的药物，其特征在于：包含TRAF1...
【专利技术属性】
技术研发人员：李红良，张晓东，张晓飞，张艳，蒋丁胜，刘小熊，
申请(专利权)人：武汉大学，
类型：发明
国别省市：
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