识别人类白血病抑制因子(LIF)的抗体和抗LIF抗体在与有害细胞增殖相关疾病的治疗中的应用制造技术

本发明专利技术涉及针对人类白血病抑制因子(LIF)的抗体以及产生所述抗体的杂交瘤细胞系。本发明专利技术还涉及阻止和抑制干细胞增殖的方法，以及用于诊断主体患有与有害细胞增殖有关疾病，或用于测定主体罹患所述与有害细胞增殖有关疾病的倾向性，或者预测患有所述疾病的主体的平均生命期望值。所述抗体的治疗潜能基于对于LIF的抑制作用可以用在用于治疗与有害细胞增殖相关疾病的治疗性组合物中的发现。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术大体上涉及用于制可识别人类白血病抑制因子(LIF)的单克隆抗体的杂交瘤细胞系（淋巴细胞杂交瘤），这种抗体的同源群，以及这种抗体在与改变了LIF的水平和活性相关的疾病的预后、诊断和治疗中的应用，这些疾病例如为与有害细胞增殖相关的疾病，更加具体的说是癌症，甚至更加具体的说是脑胶质瘤。
技术介绍
白血病抑制因子(LIF)是一种具有多种生物活性并对不同细胞类型均有影响的白细胞介素6(IL-6)-型细胞因子。人类LIF是一种具有202个氨基酸的多肽。LIF是一种重要的信号分子；尤其是，它在与有害细胞增殖相关的疾病如各种类型的肿瘤等中发挥着作用。某些肿瘤细胞可以通过诱导LIF或Sox2提高其自我更新能力（Ikushima等,Cell Stem Cell,5:504-514,2009;Penuelas等,Cancer Cell,15:315-327,2009）。LIF还牵涉到其他生理活动，例如，胚泡植入的抑制（Sengupta等,2006,Contraception,74,419-425）和表皮黑色素细胞的分化（Hirobe,2002,J.Cell.Phys.,192:315-326）。对于肿瘤而言，癌症起始细胞（CIC）是一种具有正常干细胞特性、呈现出持续的自我更新并能够产生复制原始肿瘤的特性和细胞多样性的继发性瘤的肿瘤细胞亚群。CIC被认为是造成肿瘤启动、增殖、复发、抗化疗和抗辐射的原因（Bao等,Nature,444:7756-760,2006;Dick,Blood,112:4793-4807,2008;Gupta等,Nat.Mathods,15:1010-1012,2009;Visvader和Lindeman,Nat.Rev.Cancer,8:755-768,2008;Zhou等,Nat.Rev.Drug Discov.8:806-823,2009）。所有这些特征表明，CIC是关键的治疗靶点，对CIC生物学的认识是改善抗癌疗法的关键。一些细胞表面标记物，包括CD133和CD44，已被证实可用于不同肿瘤类型中富含CIC的细胞亚群的分离（Visvader和Lindeman,Nat.Rev.Cancer,8:755-768,2008）。脑胶质瘤是最常见的脑肿瘤。脑胶质瘤的最具侵袭性的形式IV级脑胶质瘤也称为胶质母细胞瘤(GBM)，是最为最致命的癌症之一，其患者平均存活时间为14个月左右（Stupp等,N.Engl.J.Med.,352:987-996,2005）。尽管在了解涉及脑胶质瘤的成因和进展的分子机制方面已取得进展，但对这种类型的肿瘤的预后及治疗仍然办法不多。脑胶质瘤起始细胞(GIC)的特点是其高致瘤潜能、其自我更新能力及其分化为多种细胞系的能力。肿瘤中的干细胞样的细胞的数目受其自我再生能力的调节。一般情况下，GIC以及癌症干细胞通过一个干细胞产生两个与其完全相同的复制品或者一个所述干细胞的复制品和一个高度分化的细胞（非对称性分裂）进行对称性和非对称性分裂。癌症干细胞的自我再生能力受对称性和非对称性分裂之间的平衡的调节，而且所述自我更新的控制机制的失调最有可能参与肿瘤发病。据知，GIC是造成肿瘤发病、增殖和复发的原因，这说明最有效的疗法是针对肿瘤干细胞进行分区化的治疗。如果GIC没有被消除，则肿瘤就不会完全根除。TGFβ（β型转化生长因子）的信号通路通过调节靶基因参与调节诸如细胞增殖和分化等许多细胞活动。细胞因子的TGFβ家族包括TGFβs本身（如TGFβ1、TGFβ2、TGFβ3）、活化素和骨形态发生蛋白。TGFβ家族成员通过激活细胞-表面处的丝氨酸/苏氨酸激酶受体起作用，这触发了牵涉下游效应子SMAD的细胞内信号传导通路，SMAD在激活时直接转移到细胞核并激活转录。已经知道，TGFβ可以通过诱导LIF或Sox2提高GIC的自我更新能力（Ikushima等,CellStem Cell,5:504-514,2009;Penuelas等,Cancer Cell,15:315-327,2009）。TGFβ在癌症信号传导中的重要作用（Massague,Cell,134:215-230,2008）已推动了基于设计针对TGFβ的抑制性化合物的抗癌策略的临床开发（Seoane等,Clin.Transl.Oncol.,10:14-19,2008;Yingling等,Nat.Rev.Drug Discov.,3:1011-1022,2004）。在脑胶质瘤中，提高的TGFβ活性赋予患者较差的预后（Bruna等,Cancer Cell,11:147-160,2007），并显示出一种多样化的致瘤反应，其中包括诱导血管生成、抑制免疫反应、细胞侵害及细胞增殖（Bruna等,Cancer Cell,11:147-160,2007;Rich,Front.Biosci.e245-260,2003）。TGFβ家族成员调节DNA结合蛋白1(Id1)的抑制剂的表达。DNA结合蛋白的抑制剂(Id)是调节细胞周期和细胞分化并在干细胞的自我更新的控制中起着重要作用的转录因子（Perk等,Nat.Rev.Cancer,5:603-614,2005;Ying等,Cell,115:281-292,2003）。在正常的上皮细胞中，TGFβ抑制而BMP诱导Id1转录（Massague,Cell,134:215-230,2008）。然而，在内皮细胞和某些肿瘤细胞中，TGFβ能够诱导Id1表达（Goumans等,EMBO J.,1743-1753,2002;Padua等,Cell,133:66-77,2008）。Id1可以在调节这些细胞的自我更新能力方面有着重要作用的B1型成体神经干细胞中进行表达（Nam和Benezra,Cell Stem Cell,5:515-526,2009）。对于癌症而言，Id1在一些肿瘤中曾被发现上调（Perk等,Cancer Res.,2006:10870-10877,2006），并被描述为参与转移（Gupta等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,104:19506-19511,2007）。脑胶质瘤的治疗选择是手术干预。然而，手术治疗通常伴随着药物的辅助治疗或放射治疗手段。治疗脑胶质瘤的药物选择包括称为PCV的组合物，其包括甲基苄肼、CCNU（洛莫司汀）和长春新碱，以及替莫唑胺联合放疗。因此，需要有一种能有效消除GIC、防止本领域的现有技术中存在的治疗弊端的替代疗法。在专利US本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种单克隆抗体或其片段，其能够识别全长度人类LIF，但不识别对应于氨基酸第1~72位的LIF片段，更为优选地是不识别对应于氨基酸第1~127位的LIF片段，甚至更为优选地是不识别对应于氨基酸第1~160位的LIF片段。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.04.05 EP 1038004961.一种单克隆抗体或其片段，其能够识别全长度人类LIF，但不
识别对应于氨基酸第1~72位的LIF片段，更为优选地是不识别对应
于氨基酸第1~127位的LIF片段，甚至更为优选地是不识别对应于氨
基酸第1~160位的LIF片段。
2.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于：所述抗体能
够识别对应于人类LIF的氨基酸第160~202位的区域内所包含的人类
LIF的抗原表位。
3.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于：所述抗体识
别以下区域所包含的抗原表位，所述区域选自：对应于人类LIF的氨
基酸第160~180位的区域，对应于氨基酸第170~190位的区域，对应
于氨基酸第180~200位的区域，对应于氨基酸第182~202位的区域。
4.根据上述权利要求中任意一项所述的单克隆抗体，其特征在
于：所述抗体在与人类LIF的结合中受到由瓦尔德希伯伦肿瘤研究所
于2010年4月1日保藏于德国微生物菌种保藏中心的杂交瘤产生的
单克隆抗体的竞争性抑制。
5.属于IgG1同型的根据上述权利要求中任意一项所述的单克隆
抗体。
6.根据上述权利要求中任意一项所述的单克隆抗体，其特征在
于：其由瓦尔德希伯伦肿瘤研究所于2010年4月1日保藏于德国微
生物菌种保藏中心的保藏编号为DSMACC3054的杂交瘤细胞系产
生。
7.由瓦尔德希伯伦肿瘤研究所于2010年4月1日保藏于德国微生
物菌种保藏中心的杂交瘤细胞系DSM ACC3054。
8.一种用于测量人类LIF的免疫分析试剂，其包含根据权利要求
1~6中任意一项所述的单克隆抗体或其片段。
9.根据权利要求1~6中任意一项所述的单克隆抗体或其片段，其
特征在于：所述抗体或其片段通过抑制肿瘤干细胞的自我再生起作
用。
10.一种用于治疗与有害细胞增殖相关疾病的针对人类LIF的抗
体或其片段。
11.用于治疗与有害细胞增殖相关疾病的根据权利要求1~6或9
中任意一项所述的的抗体或其片段。
12.一种含有根据权利要求1~6或9~11中任意一项所述的抗体或
其片段以及药学可接受载体的药物组合物。
13.用于诊断与主体患有与害细胞增殖相关的疾病、或用于确定
主体罹患与有害细胞增殖相关的所述疾病的倾向性、或用于确定主体
患有与有害的细胞增殖相关的所述疾病的阶段或严重程度、或用于监
测对患有与有害的细胞增殖相关的所述疾病的主体施与的治疗效果
的体外方法，包括来自所述主体的生物学样本中的LIF或其功能等同
变异体的表达水平的量化，其中，相对于对照样本中的编码LIF或其
功能等同变异体的基因的表达，编码LIF或其功能等同变异体的基因
的表达的增加是与有害细胞增殖相关的疾病、或所述主体具有罹患与
有害细胞增殖相关的疾病的较大倾向性、或对所述主体施与的治疗无
反应的体现。
14.一种含有用于为诊断主体患有的与有害细胞增殖相关的疾
病、或者为了确定主体罹患所述疾病的倾向性、或者为确定主体患有
所述疾病的阶段或严重程度、或者为监测对患有所述疾病的主体的治
疗效果而对LIF或其功能等同变异体...

【专利技术属性】
技术研发人员：琼·塞奥尼·苏亚雷斯，茱蒂特·艾尼多·弗古艾拉，安德里亚·塞斯·鲍德拉斯，
申请(专利权)人：瓦尔德希伯伦肿瘤研究所，加泰罗尼亚研究和深造学院，
类型：发明
国别省市：西班牙;ES