适于治疗或预防结核的脂质体制剂制造技术

本发明专利技术提供了包含结核分枝杆菌复合群菌株之片段的脂质体制剂，还提供了结核分枝杆菌复合群菌株，其片段可掺入选定的所述脂质体制剂的实施方案中。本发明专利技术还提供了包含所述脂质体制剂的悬液和药物组合物。此外，公开了脂质体制剂的用途，其用于治疗人或动物体的方法，特别是用于治疗或预防结核的方法，例如预防潜伏期结核或预防结核，并任选地用于联合治疗中。本发明专利技术的制剂含有蔗糖并且/或者平均粒度低于结核治疗的基于脂质体的常规药剂，导致更高的生物利用度和效力。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】引言和
技术介绍

本专利技术提供了包含来自结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）复合菌株的脂质体制剂，以及包含这些制剂的悬液和药物组合物及其在治疗方法（特别是治疗或预防结核）中的相应用途。本专利技术的制剂含有蔗糖和/或平均颗粒尺寸低于结核治疗的基于脂质体的常规药剂，导致更高的生物利用度和效力。
技术介绍
结核是由结核分枝杆菌复合群（Mycobacterium tuberculosis-complex,MTB-C，其包括分枝杆菌M.tuberculosis、M.bovis、M.microti和M.africanum）杆菌导致的慢性感染性疾病。分枝杆菌细胞包膜的主要独特特征是厚且为蜡质的细胞壁。细胞壁屏障的特性还促进该生物的胞内存活，这是通过作为宿主与MTB-C杆菌之间免疫反应的直接调节剂来实现的。包膜由两个不同部分组成：质膜，及其周围的壁。细胞壁是由共价连接的肽聚糖结构形成的骨架，具有通过磷酸二酯键附着的支链多糖——阿拉伯半乳聚糖。阿拉伯半乳聚糖的远端被高分子量脂肪酸（分枝菌酸，具有分枝菌的独特大小和结构）酯化。据世界卫生组织称，全世界每年有9,000,000例人感染该疾病的新病例记录在案，约2,000,000人死亡。全世界的感染人数被认为超过2,700,000,000，每年又产生九百万至一千万的新感染。本领域中已经描述了多种基于有毒力或无毒力分枝杆菌菌株细胞壁片段的针对结核的疫苗。目前用于对结核进行预防性处理的疫苗是基于称为BCG（卡介苗，M.bovis的一种减毒变体）菌株的细菌。还已知，疫苗组合物中使用的佐剂能极大地影响其有效性。海藻糖分枝菌酸酯（特别是海藻糖二分枝菌酸酯）是结核分枝杆菌提取物中最具生物活性的脂质，其诱导影响肉芽肿形成的促炎性级联。应该指出，关于结核分枝杆菌细胞壁中这些化合物的存在量，并没有生物学数据。来自该物种的任何样品都具有高度生物复杂性。因此，为了实施定量分析，将需要激进的、复杂的并且漫长的纯化步骤，导致用于进行进一步结构分析的纯化化合物的量过低。这正是没有关于结核分枝杆菌细胞壁中每种化合物确切百分比的已公开数据的原因。一些糖脂是MTB-C细胞的典型组分，例如脂阿拉伯甘露聚糖。脂阿拉伯甘露聚糖与MTB-C毒力有关。E.Ribi et al.,Nature1963,198,1214-1215页描述了用包含无毒力卡介苗（BCG）菌株细胞壁片段和矿物油的组合物进行的免疫测定。所述片段通过在矿物油中对所述菌株的培养物进行匀浆而获得。该组合物比常规疫苗（BCG）更有效。尽管如此，同一文章中还描述了所述细胞壁片段当在水中匀浆并且不存在矿物油时不诱导免疫应答。D.P.Pal et al.,Indian J.Med.Res.1977,65,340-345页描述了用有毒力的H37Rv菌株的细胞壁片段和矿物油制备的疫苗。在这种情况下，细胞壁片段通过在水相中对死细胞进行匀浆而获得，然后向组合物中加入矿物油。还描述了，在水相中匀浆的细胞壁片段无免疫原性，必须存在矿物油才能使疫苗有效。G.K.Khuller et al.,Folia Microbiol.,1992,37,407-412页描述了结核分枝杆菌的无毒力H37Ra菌株的细胞壁的不同级分的保护性效力，所述级分与弗氏不完全佐剂（也包括矿物油）配制在一起。E.M.Agger et al.,Scand.J.Immunol.,2002,56,443-447页描述了包含有毒力的H37Rv菌株的细胞壁片段的疫苗，其在包含阳离子型表面活性剂二甲基双十八烷基溴化铵作为佐剂的情况下有效。还描述了，用不包含所述佐剂的匀浆结核分枝杆菌进行的测定在小鼠模型中不产生针对结核的抗性水平。I.M.Orme Vaccine,2006,24,2-19页是一篇结核疫苗的综述文章，其描述了，基于常规卡介苗（BCG）的疫苗在为成年人提供针对结核的保护中基本无效。可能受益于涉及结核的治疗或预防的个体可分为以下亚组：（I）未接触该疾病的个体。预防性疫苗接种可防止这些个体发生感染。（II）已接触该疾病但尚未感染的个体。皮肤结核菌素测试（TST）为阴性。初级预防（primary prophylaxis）能防止这些个体发生感染。（III）具有潜伏期结核的未发病的个体。可通过施用化学治疗来降低疾病爆发的风险。化学治疗还提供了使这些个体基本停止作为高风险感染源的优点。（IV）患病个体，即患有该疾病，通常是该疾病的原发形式，但没有或基本没有传染性。化学治疗避免这些个体变成传染性。感染开始后，本领域描述了多种用于在感染个体（即具有潜伏期结核的个体）中防止发生活动性结核的治疗。例如，在专利申请EP2196473A1中描述了，为了治疗感染个体中的结核可以在长至数月的时间中向尚未发病以及已经发病的个体施用多种药物，包括异烟肼。在专利申请ES2231037A1中描述了免疫治疗剂，其包含结核分枝杆菌复合群（MTB-C）的有毒力菌株的细胞片段，用于制备与其他药物（如异烟肼或利福霉素）联合用于治疗感染个体中的结核的药物。该专利申请还描述了用于制备包含MTB-C菌株之细胞壁片段的免疫治疗剂的方法。如WO2010/031883A1所指出，潜伏期结核感染的传播主要通过吸入被结核分枝杆菌感染的气溶胶而发生。因此，与患肺结核并因此能够散播感染气溶胶的患者直接接触的人（例如与他们住在一起或者有任何类型的充分或频繁接触的人）被认为是风险群体。因此，通常向I组个体（见上文）施用的感染初级预防是基于每天施用5mg/kg剂量的异烟肼（不超过300mg/天）的初级化学预防。该处理适用于与感染个体住在一起和/或任何类型密切接触的任何年龄的所有TST阴性个体。在这种情况下，化学预防需要在停止接触感染源后或感染源不具感染性后维持三个月。然而，化学预防在一些情况下可导致继发性的不良效果，如Martínez et al.,Arch.Bronchoneumol.,2005,41(1),27-33所述。包含有毒力结核分枝杆菌复合群（MTB-C）片段的药物已经描述于例如EP1690549B1、EP2090318A1和PCT/ES2009/000436。EP2090318A1和PCT/ES2009/000436描述了包含有毒力结核分枝杆菌复合群（MTB-C）片段的药物组合物，其作为适于预防性防止结核（任选地与其他药物组本文档来自技高网...

【技术保护点】
脂质体制剂，其包含：（a）来自结核分枝杆菌复合群（MTB‑C）菌株的片段，（b）脂质体形成剂，1至20%（w/v）的蔗糖，优选2至12%（w/v）的蔗糖，更优选3至8%（w/v）的蔗糖，最优选4至6%（w/v）的蔗糖，其中颗粒的z‑平均尺寸为120nm或更小。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2011.01.04 EP 11150072.4;2011.09.30 EP 11183487.51.脂质体制剂，其包含：
（a）来自结核分枝杆菌复合群（MTB-C）菌株的片段，
（b）脂质体形成剂，
1至20%（w/v）的蔗糖，优选2至12%（w/v）的蔗糖，更优选3至
8%（w/v）的蔗糖，最优选4至6%（w/v）的蔗糖，其中颗粒的z-平均尺
寸为120nm或更小。
2.权利要求1的脂质体制剂，其中所述颗粒的z-平均尺寸为40至
110nm，更优选55至95nm。
3.权利要求1或2中任一项的脂质体制剂，其中所述脂质体制剂为
乳剂，并且其中颗粒的z-平均尺寸优选小于40nm。
4.前述权利要求中任一项的脂质体制剂，其中颗粒的多分散性指数
为0.4或更小，优选0.3。
5.前述权利要求中任一项的脂质体制剂，其中所述结核分枝杆菌复
合群（MTB-C）菌株是有毒力的结核分枝杆菌复合群（MTB-C）菌株，优
选为2010年保藏于伦敦NCTC的MTB-C菌株NCTC13536。
6.前述权利要求中任一项的脂质体制剂，其还包含
（d）表面活性物质，
和/或
（e）一种或更多种非离子型表面活性剂。
7.前述权利要求中任一项的脂质体制剂，其中所述MTB-C细胞的片
段是细胞壁片段或者包含细胞壁片段。
8.权利要求6的脂质体制剂，其中（a）与（d）的比值为0.05:1至
1:5(w/w)。
9.前述权利要求中任一项的脂质体制剂，其中所述脂质体形成剂是
氢化的、部分氢化的或非氢化的磷脂，优选卵磷脂，最优选大豆卵磷脂。
10.权利要求10至12中任一项的脂质体制剂，其中所述表面活性物
质选自胆酸盐、脱氧胆酸盐、胆固醇和胆固醇琥珀酸单酯。
11.前述权利要求中任一项的脂质体制剂，其中所述MTB-C细胞的
片段是细胞壁片段或者包含细胞壁片段。
12.前述权利要求中任一项的脂质体制剂，其包含2010年保藏于伦
敦NCTC的MTB-C菌株NCTC13536的片段。
13.前述权利要求中任一项的脂质体制剂，其包含以下的至少两项，
优选三项，更优选四项，最优选全部：
（i）第一多肽，其在十二烷基硫酸钠（SDS）聚丙烯酰胺凝胶电泳后
测量的分子量为约70kDa，其中所述第一多肽的质量指纹图谱与结核分枝
杆菌HSP70蛋白（Rv0350）的质量指纹图谱相似，
（ii）第二多肽，其在十二烷基硫酸钠（SDS）聚丙烯酰胺凝胶电泳后
测量的分子量为约38kDa，其中所述第二多肽的质量指纹图谱与结核分枝
杆菌38kDa蛋白（Rv0934）的质量指纹图谱相似，
（iii）第三多肽，其在十二烷基硫酸钠（SDS）聚丙烯酰胺凝胶电泳
后测量的分子量为约30kDa，其中所述第三多肽的质量指纹图谱与结核分
枝杆菌Ag85B蛋白（Rv1866c）的...

【专利技术属性】
技术研发人员：佩尔·乔娜·卡唐娜·伊杰勒塞斯，伊莎贝尔·艾玛特·里拉，布兰卡·雷耶斯，艾瑞德纳·瑟格，梅尔斯·艾玛特，
申请(专利权)人：阿尔西维尔法尔玛公司，
类型：发明
国别省市：西班牙;ES