本发明专利技术为一种分析耐盐茄子遗传多样性的方法，其特征在于：所述的耐盐茄子遗传多样性分析是先采用CTAB法提取供试茄子的DNA以备用；之后利用能获得清晰多态性条带且反应稳定的26对SRAP引物组合和15个ISSR引物对供试耐盐茄子的DNA进行PCR扩增反应，并对扩增结果进行相应的处理。发明专利技术的优点在于：为区分同名异种或者同种异名的耐盐茄子品种提供了一定的依据，从而为耐盐茄子的良种选育和推广奠定了基础。
【技术实现步骤摘要】
一、
：本专利技术涉及耐盐茄子遗传多样性的分析方法，具体是一种通过SRAP引物和ISSR引物分析扩增并利用NTSYS软件对其进行聚类分析和遗传多样性分析的方法。二、
技术介绍
：随着设施栽培的快速发展，设施内土壤次生盐渍化日趋严重，导致蔬菜作物的生长发育受到抑制，产量和品质降低，这种情况严重影响了蔬菜生产的可持续发展和蔬菜生产者的经济效益。茄子作为设施栽培的重要蔬菜之一，土壤盐渍化常导致其产量和品质下降。对于盐渍化土壤的利用主要采取两种措施，一是用化学或物理方法改造土壤；二是通过生物技术培育耐盐作物品种。前者不仅耗资巨大，且随着大量化学物质的加入加重了土壤的次生盐渍化，因此，对于有效利用分子标记辅助育种技术，加快培育优质高产耐盐茄子新品种具有重要的现实意义。利用SRAP和ISSR 2种标记对筛选出的耐盐茄子种质资源进行遗传多样性及亲缘关系分析，试图为茄子耐盐品种选育提供理论指导。三、
技术实现思路
：本专利技术提出一种通过利用SRAP和ISSR 2种标记对耐盐茄子扩增分析并对其进行聚类分析和遗传多样性分析的方法。本专利技术是这样实现的：一种利用SRAP引物和ISSR引物分析耐盐茄子遗传多样性的方法，其特征在于：所述的耐盐茄子遗传多样性是利用多态性条带清晰且反应稳定的26对SRAP引物组合和15个ISSR引物对供试耐盐茄子的DNA进行PCR扩增反应；利用NTSYS软件进行聚类分析和遗传多样性分析。本专利技术的有益效果是：对茄子耐盐种质资源进行遗传多样性分析，从分子水平上认识茄子种质资源的遗传多样性和遗传亲缘关系，为杂种优势预测与亲本选配提供理论基础，为开展耐盐茄子分子育种工作奠定初步的理论基础。四、具体实施方式：该专利技术是通过利用SRAP引物和ISSR引物对耐盐茄子进行扩增并进行聚类分析和遗传多样性分析实现的。应充分考虑引物条带是否清晰，扩增条件是否合适，注意以下几点。1.本专利在对SRAP引物和ISSR引物体系优化进行了反复试验，找出最佳适合体系。2.本专利在筛选出条带清晰的引物时，进行了多份材料的反复试验，筛选出合适的引物。实施例：一种分析耐盐茄子遗传多样性的方法1.材料与方法1.1材料本试验共用14份耐盐茄子材料(分别于2009年、2010年在上海市农科院庄行试验站筛选鉴定完成)，由上海市农科院园艺研究所提供，材料的来源见表1。表1材料名称和编号Table 1 The code and name of materials2试验方法2.1试剂试验所用的提取DNA、PCR试剂和琼脂糖均购自上海生工生物工程有限公司。表2 SRAP、ISSR引物序列2.2模版DNA提取分别选取不同材料的幼叶，用CTAB法提取了茄子基因组DNA，具体参照马金骏(2008)的方法。采用1.0％琼脂糖电泳检测DNA的纯度，-20℃冰箱内保存备用。2.3 SRAP反应体系和程序SRAP扩增反应采用20μL的反应体系，其中包含25mmol·L-1 MgCl2 2μL，10×PCR Buffer 2.0μL，10mmol·L-1 dNTP0.4μL，5U·μL-1 Taq E 0.2μL，10ng·L-1模板DNA 3μL，0.1μmol·L-1 Primer 3μL，灭菌双蒸水6.4μL，加盖一滴矿物油进行扩增。扩增程序：94℃预变性5min；94℃变性1min，35℃退火1min，72℃延伸1.5min，5个循环；94℃变性1min，50℃退火1min，72℃延伸1.5min，35个循环；72℃延伸10min后4℃保存。2.4 ISSR反应体系和程序ISSR扩增反应采用20μL的反应体系，其中包含25mmol·L-1 MgCl2 2μL，10×PCR Buffer 2.0μL，10mmol·L-1 dNTP0.5μL，5U·μL-1 Taq E 0.2μL，10ng·L-1模板DNA 3μL，0.1μmol·L-1 Primer 0.5μL，灭菌双蒸水11.8μL，加盖一滴矿物油进行扩增。扩增程序：94℃预变性5min；94℃变性1min，37℃退火1min，72℃延伸1.5min，40个循环；94℃变性1min，50℃退火1min，72℃延伸1.5min，35个循环；72℃延伸10min后4℃保存。2.5电泳检测PCR扩增产物(SRAP和ISSR)在2.5％琼脂糖凝胶(含EB)电泳分离，电压120V，时间约1.5h，Gel DocTM EQ 170-8060凝胶成像仪进行观察并拍照分析。3数据分析选择清晰的谱带进行统计，扩增产物在相同迁移位置有带赋值为1，无带赋值为0，建立原始数据矩阵。应用NTSYS-pc(version 2.1)软件处理并采用非加权类平均法(UPGMA)进行聚类分析，得到遗传相似系数，并根据遗传相似系数建立聚类分析图。并对2种标记得到的遗传相似系数矩阵进行Mantel相关性检测，用以比较2种标记方法所得结果的一致程度。2结果与分析2.1遗传相似性分析分别利用26个SRAP引物组合产生的263条DNA片段和15个ISSR引物产生的141条DNA片段计算了供试材料间的遗传相似系数。SRAP标记揭示的材料间遗传相似系数值变化范围为0.212～0.923，平均值为0.755。其中，E13与其他材料的的遗传相似系数0.212～0.259，说明E13与其他材料关系较远。E2与E3、E10与E11的遗传相似系数值最大，分别为0.927、0.923，遗传相似程度较高，亲缘关系较近。ISSR标记揭示的材料间遗传相似系数值变化范围为0.333～0.957，平均值为0.736。其中，E13与其他材料的的遗传相似系数0.333～0.433，说明E13与其他材料关系较远，与SRAP标记结果一致。E3与E4和E5与E6的遗传相似系数值最大，分别为0.915和0.957，遗传相似程度较高，亲缘关系较近。以上结果表明，SRAP标记揭示的遗传相似系数值的范围比ISSR标记稍大，平均遗传相似系数值大于ISSR标记，表明SRAP标记比ISSR标记更能揭示材料间的遗传变异。2.2聚类分析根据SRAP和ISSR标记计算的遗传相似系数矩阵，按UPGMA法构建了材料间的遗传关系聚类图。结果表明，2种标记都能将14份耐盐茄子材料完全区分开，聚类结果具有一定相似性，但又不完全相同。从SRAP聚类图(图1-A)看，遗传相似系数值约0.840时，可将所有供试材料划分为5本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种利用SRAP引物和ISSR引物分析耐盐茄子遗传多样性的方法，其特征在于：所述的耐盐茄子遗传多样性是利用多态性条带清晰且反应稳定的26对SRAP引物组合和15个ISSR引物对供试耐盐茄子的DNA进行PCR扩增反应；利用NTSYS软件进行聚类分析和遗传多样性分析，分析耐盐茄子的遗传亲缘关系。
【技术特征摘要】
1.一种利用SRAP引物和ISSR引物分析耐盐茄子遗传多样性的方法，其特征在于：所
述的耐盐茄子遗传多样性是利用多态性条带清晰且反应稳定的26对SRAP引物组合
和15个ISSR引物对供试耐盐茄子的DNA进行PCR扩增反应；利用NTSYS软件进
行聚类分析和遗传多样性分析，分析耐盐茄子的遗传亲缘关系。
2.根据权利要求1所述的耐盐茄子遗传...
【专利技术属性】
技术研发人员：吴雪霞，查丁石，李贤，朱宗文，
申请(专利权)人：上海市农业科学院，上海科园种子有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31
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