生防菌株BS102在防治农作物黄曲霉毒素污染中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种生防菌株BS102在防治农作物黄曲霉毒素污染中的应用，所述的生防菌株BS102为枯草芽孢杆菌（Bacillus?subtilis）BS102，保藏编号为CGMCC?No.7728。所述的应用包括：制备含所述生防菌株BS102的生防菌剂；将所述的生防菌剂施在所述的农作物上。本发明专利技术的生防菌株对黄曲霉的拮抗作用强烈，可用于黄曲霉毒素污染的防治。且本发明专利技术提供了黄曲霉毒素污染的生物防治方法，不使用化学农药，具有无毒、不易产生抗药性、环境和生物安全等优点，具有广阔的应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于作物病害防控
，尤其涉及一种生防菌株BS102在防治农作物黄曲霉毒素污染中的应用。
技术介绍
据世界粮农组织估计，目前世界范围内有25％的农作物产品受真菌毒素的污染，其中主要就是黄曲霉毒素（Aflatoxin，以下简写成AFT）。黄曲霉毒素中，毒性最强、危害最大的为B1毒素，其毒性为氰化钾的10倍、砒霜的68倍，被列入严管的特剧毒物质。2006年，国家疾病预防控制中心营养与食品安全所对我国部分食品（包括玉米、花生）中黄曲霉毒素污染情况调查发现，从江苏、上海、浙江等九省市采集市售玉米中AFT的检出率为70.27％，平均含量为36.51ug／kg，最高为1098.36ug／kg，并有14.86％的玉米样品中B1毒素含量超出国家限量标准。花生中黄曲霉毒素的检出率为24.24％，平均含量为80.27ug／kg，最高为437.09ug／kg，且有3.03％的花生样品中黄曲霉毒素含量超出国家食品法典限量标准。由此可见，黄曲霉毒素污染严重威胁我国花生和玉米等作物的安全生产，而且严重影响着食品安全和农产品出口竞争力。由于AFT污染所带来的巨大经济损失和严重的食品安全问题，人们一直在努力寻求有效控制AFT污染的策略和措施，包括良好的田间管理、虫害控制、抗性育种等，但这些都没能从根本上解决问题。近来美国研究发现，利用不产毒素的黄曲霉菌株能有效控制农产品AFT的污染问题。我国在AFT生物防治方面研究还刚刚起步。已有研究发现，一株不产黄曲毒素的黄曲霉菌株A051可用来控制农产品黄曲霉毒素的污染（ZL200810120929.2），由乳酪杆菌、枯草芽孢杆菌和异常汉逊酵母复合培养液在抑制黄曲霉生长和降解毒素方面有一定作用（CN201110190287.5）。公开号为CN102816725A的中国专利文献还公开了一种枯草芽孢杆菌T-500，该菌株虽然对多种病原菌具有拮抗作用，但是对黄曲霉菌的抑制率仅为35.7%，效果较差。我国微生物资源丰富，挖掘其它控制黄曲霉毒素污染的潜在生防菌，对有效控制我国黄曲霉毒素污染意义重大。
技术实现思路
本专利技术提供了一种生防菌株BS102在防治农作物黄曲霉毒素污染中的应用。所述生防菌株BS102的分类命名枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis），完整命名为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）BS102，已于2013年6月18日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为：CGMCC No.7728。该菌株BS102在LB培养基上菌落表面粗糙、不透明，呈现皱缩、白色，能够形成芽孢，能移动，需氧型。实验发现，本专利技术的生防菌株BS102对黄曲霉菌菌丝生长、孢子萌发有较好的抑制作用，对储存过程中花生黄曲霉毒素污染具有较好的防治效果，因此，可将该生防菌株BS102用于防治农作物的黄曲霉毒素污染。所述的农作物具体可以为花生，其中，所述花生的品种具体可以为鲁花9号。所述应用具体包括：（1）制备含所述生防菌株BS102的生防菌剂；（2）将所述的生防菌剂喷施在所述的农作物上。喷施生防菌剂时，选择农作物易被黄曲霉毒素污染的时期进行喷施,喷施至农作物表面水珠流动即可。如对花生黄曲霉毒素污染进行防治时，可在储藏期将所述的生防菌剂喷施在花生果实上，喷施至花生果实表面水珠流动即可，喷施结束后可将花生置于常温储存。为达到较好的防治效果，所述的生防菌剂中，所述生防菌株BS102的浓度优选为1×108～1010CFU/mL，更优选为1×108CFU/mL。所述生防菌剂可通过如下方法进行制备：（1）将所述生防菌株BS102于培养基中培养至OD600为0.5～0.8，获得种子液；（2）将种子液接种于发酵培养液中扩大培养，调节发酵液中生防菌株BS102的浓度至1×108～1010CFU/mL，获得所述生防菌剂。所述的培养基可选用LB液体培养基。其中，所述种子液的接种量优选为1～2%（v/v），优选为1%（v/v）。以每升计，所述发酵培养液的配方为：葡萄糖，18～22g；L-谷氨酸，2.4～2.6g；L-天门冬酰胺，2.4～2.6g；KH2PO4，0.8～1.2g；MgSO4·7H2O，0.4～0.6g；KCl，0.4～0.6g；酵母粉，0.8～1.2g；L-苯丙氨酸，2～3×10-3g；MnSO4·H2O，5～6×10-3g；CuSO4·5H2O，0.16～0.18×10-3g；FeSO4·7H2O，0.15～0.17×10-3g；调节pH值为7.0。作为进一步优选，以每升计，所述发酵培养基液的配方为：葡萄糖，20g；L-谷氨酸，2.5g；L-天门冬酰胺，2.5g；KH2PO4，1g；MgSO4·7H2O，0.5g；KCl，0.5g；酵母粉，1g；L-苯丙氨酸，2×10-3g；MnSO4·H2O，5×10-3g；CuSO4·5H2O，0.16×10-3g；FeSO4·7H2O，0.15×10-3g；调节pH值为7.0。该发酵培养液由Landy培养基改良而来，更有利于本专利技术所述枯草芽孢杆菌的增殖。本专利技术中，所述扩大培养是发酵罐中进行的，所述扩大培养的温度为28～30℃，优选为30℃，所述扩大培养的时间为20～24h。在该培养条件下，在保证菌活力的同时使其具有较快的增殖速度。扩大培养过程中，发酵液pH值维持在7.0，溶氧量20%，通气量5-7m3/小时，转速240～260r/min，罐压0.05-0.1KPa。发酵液出罐后梯度稀释涂板检测并调节菌悬液浓度为1×108～1010CFU/mL。与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：（1）本专利技术的生防菌株BS102为枯草芽孢杆菌，生防菌BS102菌体和上清在平板拮抗试验中显示对黄曲霉菌菌丝生长、孢子萌发有较好的抑制作用，可将其应用于农作物黄曲霉毒素污染中的生物防治。（2）光照培养箱进行的花生黄曲霉毒素污染防治试验效果显示，本专利技术的生防菌株BS102能有效抑制病菌在花生表面的生长，防效高达92.04%，在常温贮藏条件下，本专利技术的生防菌株BS102对花生黄曲霉毒素污染的防效仍可达到71%以上，防治效果好，因此可利用该生防菌株BS102防治花生黄曲霉毒素污染。（3）本专利技术生防菌株BS102应用于农作物黄曲霉毒素污染中的防治，可完全克服因化学农药的使用所带来的一系列问题，因而有利于农产品的无公害生产，农民可以不用或减少其他化学农药的本文档来自技高网...

【技术保护点】
生防菌株BS102在防治农作物黄曲霉毒素污染中的应用，其特征在于，所述生防菌株BS102为枯草芽孢杆菌（Bacillus?subtilis）BS102，保藏编号为CGMCC?No.7728。

【技术特征摘要】
1.生防菌株BS102在防治农作物黄曲霉毒素污染中的应用，其特征
在于，所述生防菌株BS102为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）BS102，
保藏编号为CGMCC No.7728。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的农作物为花生。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述花生的品种为鲁花9
号。
4.如权利要求1～3任一项所述的应用，其特征在于，所述的应用包
括：
（1）制备含所述生防菌株BS102的生防菌剂；
（2）将所述的生防菌剂施在所述的农作物上。
5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述的生防菌剂中，所
述生防菌株BS102的浓度为1×108～1010CFU/mL。
6.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述生防菌剂通过如下
方法进行制备：
（1）将所述生防菌株BS102...

【专利技术属性】
技术研发人员：尹燕妮，陈云，马忠华，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：