一种从降香檀叶中提取、分离和纯化异黄酮活性成分鹰嘴豆芽素A和染料木素的方法技术

本发明专利技术涉及一种从降香檀叶中提取、分离和纯化鹰嘴豆芽素A与染料木素的方法，所采取的技术方案是：以降香檀叶为原料，采用匀浆破碎酶诱导技术、溶剂提取技术、空化振荡分散技术、大孔吸附树脂富集技术、正相硅胶中压柱层析分离技术以及低温析晶和重结晶技术等得到鹰嘴豆芽素A和染料木素单体，纯度均可达95%以上。由于降香檀叶资源丰富，而且本发明专利技术提取过程简单，分离成本低廉，而且省时省力，可以进行工业上的大量生产，具有很高的医学价值和广阔的市场前景。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术涉及一种从降香檀叶中提取、分离和纯化鹰嘴豆芽素A与染料木素的方法，所采取的技术方案是：以降香檀叶为原料，采用匀浆破碎酶诱导技术、溶剂提取技术、空化振荡分散技术、大孔吸附树脂富集技术、正相硅胶中压柱层析分离技术以及低温析晶和重结晶技术等得到鹰嘴豆芽素A和染料木素单体，纯度均可达95%以上。由于降香檀叶资源丰富，而且本专利技术提取过程简单，分离成本低廉，而且省时省力，可以进行工业上的大量生产，具有很高的医学价值和广阔的市场前景。【专利说明】一种从降香擅叶中提取、分离和纯化异黄酮活性成分鹰嘴豆芽素A和染料木素的方法
本专利技术涉及一种从降香檀叶中提取、分离和纯化中草药活性成分鹰嘴豆芽素A、染料木素的方法，属于天然药物的分离纯化
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技术介绍
降香檀(Dalbergia odorifera T.Chen)又名花梨木，属于豆科黄檀属植物。作为药用活性的部位是其树干和根部的干燥心材，有行气活血，止痛止血的功效，多应用于脘腹疼痛，肝郁胁痛，跌打损伤，外伤出血，有抗炎，抗凝作用，降香檀还可以与其他活血化瘀药配伍用于心血管疾病的治疗。目前对于降香檀这种木本植物的种植比较广泛，而有关降香檀的研究和利用主要集中在降香檀的心材，对降香檀叶这种可持续利用的资源研究较少。本专利技术通过对降香檀叶的研究发现，降香檀叶中也含有丰富的药用活性成分，其中鹰嘴豆芽素A和染料木素的含量非常丰富，因此选用可再生降香檀叶作为原料提取鹰嘴豆芽素A和染料木素既不会影响植物整体的生长发育，又使降香檀得到了有效利用鹰嘴豆芽素A和染料木素是异黄酮类化合物，同时也是植物雌激素类化合物。在体内代谢中，能发挥雌激素样作用，几乎分布到人体每个细胞中发挥作用，这是人体自身激素所达不到的；它们具有双向的调节作用，当人体雌激素水平高时，可抑制激素分泌，反之，当人体雌激素水平低时，它们能提供额外的雌激素样作用。临床上鹰嘴豆芽素A和染料木素既被用来治疗妇女体内雌激素水平升高时的经前期综合症，又被用于治疗雌激素降低时的更年期综合症和绝经。另外，也能治疗由雌激素代谢紊乱引起的骨质疏松症、心血管疾病、老年痴呆、雌激素 依赖性肿瘤(如子宫癌、乳腺癌、前列腺癌、结肠癌等)。此外，鹰嘴豆芽素A和染料木素还具有抗氧化、抗真菌和抗HIV病毒的作用。鹰嘴豆芽素A和染料木素作为异黄酮类成分是一类很好的药理活性成分，在医药领域中有良好的发展前景。目前，虽然对于染料木素的提取纯化有一些研究，但是有关鹰嘴豆芽素A提取、分离和纯化方面的研究很少，以往对于鹰嘴豆芽素A的提纯是先用传统的醇提，再进行反复柱层析分离来获得的。传统的醇提方法耗时长，提取过程繁琐，提取不完全以及目标化合物损失较多的缺点。采用柱层析分离时通常都需要经过多次层析，才能获得目标化合物，分离过程漫长，多次层析更增加了有机溶剂的使用量，使得提纯工艺不经济，大大增加了有毒物质的排放。在原料来源方面，传统的工艺大多都是从豆科草本植物(如红车轴草、鹰嘴豆)中提取纯化鹰嘴豆芽素A，由于分离条件，提纯工艺，原料采摘和含量等因素的限制，对于鹰嘴豆芽素A的分离难度较大，分离成本也较高。本专利技术旨在找到一种理想的生产原料并建立一种通过多种现代生物诱导技术和分离纯化技术相结合的方法，实现简单快速、绿色环保、收率高的提取、分离纯化鹰嘴豆芽素和染料木素的方法，这为鹰嘴豆芽素A和染料木素在医药领域的进一步开发和利用可以提供更广阔的发展前景。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种以新鲜或干燥的降香檀叶为原料，通过匀浆破碎酶诱导技术、溶剂提取技术、空化振荡分散技术、大孔吸附树脂富集技术、正相硅胶中压柱层析分离技术及低温析晶和重结晶技术快速、大量地获得鹰嘴豆芽素A和染料木素单体，该方法简单易行、目标化合物损失少。本专利技术的目的是通过以下方案来实现的:新鲜或干燥降香檀叶经过匀浆机械破碎、酶诱导水解，后经70~95%乙醇溶剂提取，提取物加入40~50°C水，再空化振荡分散提取物，静止，所得到的分散物经大孔树脂法富集和一次正相硅胶中压柱层析后得到鹰嘴豆芽素A和染料木素的粗品，纯度大于80%，经过低温析晶和重结晶后得到纯度大于95%的纯品。上述的鹰嘴豆芽素A和染料木素提取纯化方法，其特征在于:(I)取一定量的新鲜或干燥的降香檀叶加入水匀浆，按固形物重量的0.2~1.5%加入复合酶(纤维素酶、果胶酶、葡萄糖苷酶)，匀浆破碎酶诱导5~lOmin，抽滤，所得固形物使用70~95%乙醇超声波辅助提取3~5次，每次40~60min，然后将酶解液及乙醇提取液合并减压浓缩后回收乙醇。(2)将所得到的提取物加入4~8倍体积的40~50°C水，空化振荡分散40~60min,静止 15 ~20min。(3)将得到的分散物用进行液液萃取，萃取所用的溶剂体积为体系的1/2，萃取次数为2~5次，所用溶剂除乙酸乙酯外还包括三氯甲烷、二氯甲烷，浓缩萃取液至干。将得到的固形物以水混悬，配置成料液浓度为10~25mg/mL混悬药液，同时将大孔吸附树脂采用湿法装柱，保留液面，将混悬的药液通过吸附柱，上样量1.0~3.0BV,以流速为每小时6~9mL/g树脂条件下过吸附柱。吸附后用30~50%乙醇2BV洗杂质，然后分别用50~60%和70~90%的乙醇8~IOBV解吸附。收集解吸液，浓缩至干得到目标化合物粗品。(4)预先称取质量为化合物粗品质量的15~25倍的硅胶，采用湿法装柱。将所得固形物用少量有机溶剂溶解，加入与目标化合物粗品质量比为1:1 (w/W)的层析硅胶拌匀、减压旋干，装入正相硅胶中压柱。所用流动相为正己烷或石油醚与二氯甲烷、三氯甲烷、乙酸乙酯或丙酮中的一种按照体积比30:1~O:1的混合体系，以10~20BV的流速进行连续中压梯度洗脱，收集洗脱液。TLC监测收集流分，合并相同部分，展开剂为正己烷:乙酸乙酯=5:1~1:1，紫外波长为254nm和365nm。分别得到鹰嘴豆芽素A和染料木素溶液，低温析晶得到粗品，重结晶后得到纯品。上述的降香檀叶片中鹰嘴豆芽素A和染料木素的提取纯化方法所用的大孔吸附树脂为 ME-2、HPD-500、ADS-5、H103、HP-20、YWD-01、DA201 或 S8 型等。上述的降香檀叶中鹰嘴豆芽素A和染料木素的提取纯化方法所用硅胶为300~800目。中压硅胶柱流动相包括(正己烷、石油醚)~(二氯甲烷、三氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮)的不同比例梯度。重结晶所用的溶剂为石油醚、正己烷、三氯甲烷、丙酮、乙酸乙酯，重结晶所用溶剂比例为石油醚或正己烷:乙酸乙酯、三氯甲烷或丙酮=20:1~1:1。低温析晶温度为-10~4。。。利用本专利技术的方法提取、分离和纯化鹰嘴豆芽素A和染料木素的纯度匀可达到95%以上，并且该方法首次被应用到降香叶中鹰嘴豆芽素A的提取、分离和纯化方面。本专利技术的优点:1.本专利技术以在农业生产或家具生产中大都被废弃的新鲜或者干燥的降香檀叶片为提取原料，可以在不破坏植物生态平衡、不影响农业生产的基础上，对植物资源进行高效合理的利用。2.采用大量先进的技术(例如:匀浆破碎酶诱导技术、溶剂提取技术、空化振荡分散技术、大孔吸附树脂富集技术、正相硅胶中压柱层析分离技术及低温析晶和重结晶技术)来提取分离和纯化降香檀叶中的鹰嘴豆芽素A和染料木素，所得产本文档来自技高网...

【技术保护点】
本专利技术涉及一种从降香檀叶中提取、分离和纯化异黄酮活性成分鹰嘴豆芽素A和染料木素的方法，其步骤如下：降香檀叶经匀浆破碎酶诱导后，将酶解液抽滤，所得固形物用乙醇提取，合并酶解液及乙醇提取液，浓缩后加入40～50℃水，空化振荡分散、静止，所得到的分散物经液液萃取、大孔吸附树脂富集和一次正相硅胶中压柱层析分离后分别得到鹰嘴豆芽素A和染料木素粗品，再经过低温析晶和重结晶技术得到纯度95%以上的鹰嘴豆芽素A和染料木素单体，最后通过MTT法测定鹰嘴豆芽素A和染料木素的抗肿瘤细胞活性。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：付玉杰，王微，马飞跃，罗猛，顾成波，李吉，魏作富，
申请(专利权)人：东北林业大学，付玉杰，
类型：发明
国别省市：黑龙江;23